[发明专利]一种用于细胞诱导自组织成多细胞球的3D凝胶载体及多细胞球培养方法

权利要求书

1.一种用于细胞诱导自组织成多细胞球的3D凝胶载体，其特征在于通过以下方法制备获得：

首先，将交联剂BIS、抗细胞粘附组分A和促细胞粘附组分B，加入PBS溶液中，然后加入交联引发剂，在振荡或搅拌条件下水浴加热至50-60℃完全溶解得到水凝胶溶液；

然后，将水凝胶溶液注入透明模具中，控制温度在20-35℃，进行波长为405nm的光照，发生固化反应得到3D凝胶；

最后，将得到3D凝胶浸入PBS溶液中，并通过环氧乙烷进行灭菌处理，备用；其中，所述抗细胞粘附组分为PEGDA、丙烯酰胺或聚乙烯醇；所述促细胞粘附组分为GelMA、丙烯酰氨基胶原、丙烯酰氨基纤维蛋白原。

2.根据权利要求1所述用于细胞诱导自组织成多细胞球的3D凝胶载体，其特征在于：所述交联引发剂为LAP。

3.一种结直肠癌细胞LOVO的多细胞球培养方法，将结直肠癌细胞LOVO以0.1-0.2X10⁶的密度接种在权利要求1或2所述3D凝胶载体的表面，并置于培养液中，在温度为37±2℃，4-5％二氧化碳浓度的环境下进行培养，每两天更换一次培养液，培养至少7天后，完成多细胞球结构培养；其中，在制备3D凝胶载体过程中，水凝胶溶液中添加的PEGDA、GelMA和交联剂BIS的质量比分别为10％、10％、0.5％。

4.一种胃癌细胞SGC7901多细胞球培养方法，将胃癌细胞SGC7901以0.1-0.2X10⁶的密度接种在权利要求1或2所述3D凝胶载体的表面，并置于培养液中，在温度为37±2℃，4-5％二氧化碳浓度的环境下进行培养，每两天更换一次培养液，培养至少7天后，完成多细胞球结构培养；其中，在制备3D凝胶载体过程中，水凝胶溶液中添加的PEGDA、GelMA和交联剂BIS的质量比分别为10％、15％、0.5％。

5.一种卵巢癌细胞SKOV3多细胞球培养方法，将卵巢癌细胞SKOV3以0.1-0.2X10⁶的密度接种在权利要求1或2所述3D凝胶载体的表面，并置于培养液中，在温度为37±2℃，4-5％二氧化碳浓度的环境下进行培养，每两天更换一次培养液，培养至少7天后，完成多细胞球结构培养；其中，在制备3D凝胶载体过程中，水凝胶溶液中添加的PEGDA、GelMA和交联剂BIS的质量比分别为10％、5％、0.5％。

6.一种乳腺癌细胞MCF-7多细胞球培养方法，将乳腺癌细胞MCF-7以0.1-0.2X10⁶的密度接种在权利要求1或2所述3D凝胶载体的表面，并置于培养液中，在温度为37±2℃，4-5％二氧化碳浓度的环境下进行培养，每两天更换一次培养液，培养至少7天后，完成多细胞球结构培养；其中，在制备3D凝胶载体过程中，水凝胶溶液中添加的PEGDA、GelMA和交联剂BIS的质量比分别为10％、20％、0.5％。