[发明专利]CRISPR系统及其在构建LRP5基因突变的骨质疏松症克隆猪核供体细胞中的应用有效
| 申请号： | 202011168189.7 | 申请日： | 2020-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN112522310B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;陶裴裴;曾为俊;王磊;程锐;马翔;赵泽英;刘璐;黄彩云 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/62;C12N15/12;C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crispr 系统 及其 构建 lrp5 基因突变 骨质 疏松 克隆 供体 细胞 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于猪LRP5基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于包含Cas9表达载体和针对猪LRP5基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.1所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO载体；针对猪LRP5基因的gRNA表达载体的载体骨架为pKG-U6gRNA，质粒全序列如SEQ ID NO.3所示；所述的针对猪LRP5基因的gRNA表达载体中含有针对靶标位点的gRNA序列，所述的gRNA序列由SEQ ID NO.20所示的单链DNA和SEQID NO.21所示的单链DNA退火而成；该表达载体表达SEQ ID NO.28所示的gRNA，其靶点如SEQ ID NO.16所示；所述的gRNA表达载体和Cas9表达载体的摩尔比为3:1。
2.权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统在构建LRP5基因敲除的猪重组细胞中的应用。
3.一种LRP5基因敲除的猪重组细胞，其特征在于由权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。
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