[发明专利]一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的引物以及试剂盒

说明书

本发明公开一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的引物以及试剂盒，本发明以改良后的LAMP技术为基因扩增反应原理，在反应体系里加入金纳米颗粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升温过程中的非特异性反应，达到热启动的目的，避免在升温过程中的非特异性反应；结合改良后的LAMP技术与微流控芯片技术，既可以快速、准确的检测区分兔瘟与兔瘟2型，同时，反应试剂预埋于微流控芯片上，实现一样双指标检测，又使用户操作简便。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的引物以及试剂盒。

背景技术

兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease，RHD)，俗称兔瘟，是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起的兔的一种急性、高度致死性传染病。RHD以呼吸系统出血，实质器官淤血、肿大、出血和肝脏坏死为主要病变特征，主要危害2月龄以上的养殖和野生的多个穴兔品种，死亡率达80%-100%。2010年在法国出现了由RHDV新种即兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus 2，RHDV2)引起的能感染致死30日龄以内的兔子和传统RHDV毒株灭活苗的免疫过的兔子的新型兔病毒性出血症(newrabbit hemorrhagic disease，nRHD)，也称为兔病毒性出血症2型(rabbit hemorrhagicdisease type 2，RHD2)。目前的诊断方法是RT-PCR法。采用现有的PCR技术，由于其反应要在2个不同的温度区循环，对仪器要求高，成本也相对高昂，并且PCR技术仅仅1对扩增引物，易受干扰，特异性相对不足，且出结果时间较久，操作专业要求高，微量加量步骤多。而LAMP技术共有4条不同的特异性引物，故而检测结果准确度更高，但是由于是恒温反应，缺少类似PCR的热启动酶，在设备升温阶段容易产生非特异性扩增从而影响检测结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷提供一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的引物及试剂盒。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的引物，具体为：

RHDV-F3：CCGGCACAAACCAAAAYC；

RHDV-B3：GTGCGCCTGACRACAGAC；

RHDV-FIP：ATGTGACGGCAYTGGCGTTT-CCGGACTGTTTGTGATGGC；

RHDV-BIP：

TTGTRACTACACCCGGCACTCC-GCGAACATGATGGGTGTGTT；

RHDV2-F3：GCTTCCGGCTTCATGGAAC；

RHDV2-B3：GAAAAGCCATTGGTTGTGCC；

RHDV2-FIP：

TCRATGAGGGTGGCTGAAGCC-TTGGCTTGAGTGTTGATGGA；

RHDV2-BIP：

AGAVCTTGTTGACATCCGCCC-ARTTGTACACRAGCGTRCT。

本发明还提供一种高效二联检测兔瘟和兔瘟2型的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物以及反应液，所述反应液的组成为：

20 mM Tris-HCl 0.2 μL

40 mM KCl 6.8 μL