[发明专利]一种用于鉴定青花菜品种浙青80的SNP标记

权利要求书

1.一种用于鉴定青花菜品种‘浙青80’的引物组合，其特征在于，所述的引物组合由以下引物组成：

正向引物F1、H1和反向引物C1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示；引物F1、H1和C1扩增的分子标记为KCM8001，分子标记KCM8001具有G/A多态性；

正向引物F2、H2和反向引物C2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4~6所示；引物F2、H2和C2扩增的分子标记为KCM8002，分子标记KCM8002具有G/C多态性；

正向引物F3、H3和反向引物C3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7~9所示；引物F3、H3和C3扩增的分子标记为KCM8003，分子标记KCM8003具有T/C多态性。

2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，引物F1、F2、F3的5'端连接有序列如SEQ ID NO.10所示的通用接头，引物H1、H2、H3的5'端连接有序列如SEQ ID NO.11所示的通用接头。

3.一种用于鉴定青花菜品种‘浙青80’的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，引物F1、F2、F3的5'端连接有序列如SEQID NO.10所示的通用接头，引物H1、H2、H3的5'端连接有序列如SEQ ID NO.11所示的通用接头。

5.一种鉴定青花菜品种‘浙青80’的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取待测青花菜基因组DNA；

2）利用权利要求2所述引物组合进行PCR扩增；

3）采用荧光检测仪分析PCR扩增产物；当KCM8001、KCM8002、KCM8003的基因型结果分别为GG、CC、CC，则可判定待测青花菜为‘浙青80’父本；当KCM8001、KCM8002、KCM8003的基因型结果分别为AA、GG、TT，则可判定待测青花菜为‘浙青80’母本；当KCM8001、KCM8002、KCM8003的基因型结果分别为GA、CG、CT，则可判定待测青花菜为‘浙青80’杂交种F1；缺失基因型除外的其它情况，则可判定待测青花菜为异型株。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反应体系为：PCR预混液5μL；引物混合液0.14μL，其中各引物的终浓度均为5nM；20ng/μL模板DNA 5μL。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反应程序为：94℃预变性15min；94℃变性20s，61-55℃退火延伸60s，每个循环的退火温度降低0.6℃，共10个循环；94℃变性20s，55℃退火延伸60s，共26个循环。