[发明专利]一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法

说明书

本发明涉及生物化学相关技术领域，具体涉及一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法。其技术要点如下：包括独立包装的抗试剂A、抗试剂B、磁性碳量子点试剂、校准品、质控品、清洗液和发光底物；其中，磁性荧光纳米碳量子点试剂是Fe₃O₄@C@CdTe复合试剂、Mn₂B₃@C@CdTe复合试剂或Fe₂B₃@C@CdTe复合试剂中的任意一种。本发明通过磁性荧光碳量子点将电化学发光技术和细菌检测手段结合起来，具有发光谱带宽、色纯度高、激发态寿命长、吸收激发能量强、转换效率高等优点，其发光强度远高于传统发光材料，进而提高口腔幽门螺旋杆菌的检测效率和准确度。

技术领域

本发明涉及生物化学相关技术领域，具体涉及一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法。

背景技术

幽门螺杆菌已成为世界范围内对人类健康的威胁。考虑到口腔是幽门螺杆菌的潜在胃外储库，可能是感染源，再感染和传播途径，研究人员还努力探索H.pylori感染与口腔疾病之间的关系。口腔幽门螺杆菌患病率高的牙周炎患者，牙周健康状况差，牙周袋先进，牙龈和牙龈出血现象。一项回顾性研究也表明幽门螺杆菌感染的儿童患龋的风险增加。且大量报道都表明定植在口腔中的细菌对人体的影响范围已远远超越它们的原本定植地。而幽门螺旋杆菌作为一种微需氧的革兰阴性螺杆菌可以在大多数的慢性胃炎患者的口腔中发现，胃部幽门螺旋杆菌反复发作无法根除也被证明与口腔定植有关。口腔存在多位点适于幽门螺杆菌生存，如牙菌斑和牙周袋，作为胃部细菌的储水库，口腔细菌是发生胃炎的危险因素，引起胃炎反复发作和迁延不愈，长期刺激引起胃粘膜的增生分化，进而引发胃癌。而现有技术针对幽门螺旋杆菌的治疗集中在胃部，对口腔的幽门螺旋杆菌的检测和治疗一直被人们忽视，这样间接影响了幽门螺旋杆菌的治疗效果。忽视口腔幽门螺旋杆菌的治疗的主要原因是，口腔内的菌落组成比胃部的菌落组成更加复杂，幽门螺旋杆菌的丰都小，现有的检测手段难以快速准确的对口腔内的幽门螺旋杆菌进行检测。

有鉴于上述现有的口腔幽门螺旋杆菌检测技术中存在的缺陷，本发明人基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法，通过磁性荧光碳量子点将电化学发光技术和细菌检测手段结合起来，达到准确、快速检测口腔内幽门螺旋杆菌的目的。经过不断的研究、设计，并经反复试作样品及改进后，终于创设出确具实用价值的本发明。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，通过磁性荧光碳量子点将电化学发光技术和细菌检测手段结合起来，达到准确、快速检测口腔内幽门螺旋杆菌的目的。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

本发明的作用原理是：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的HP抗原与碱性磷酸酶(AP)标记的HP抗原和样本、校准品或质控品中的HP抗体结合形成“三明治”复合物。随后加入连有抗FITC抗体的磁性荧光纳米碳量子点，通过抗FITC抗体与FITC的特异性结合使抗原抗体免疫复合物结合在磁性荧光纳米碳量子点上。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离，清洗复合物后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光仪检测反应的发光强度。在检测范围内，发光强度与样本中的HP抗体的含量成正比，使用改良的四参数Logistic方程拟合可计算出样本中HP抗体浓度。