[发明专利]一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法

权利要求书

1.一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，包括独立包装的抗试剂A、抗试剂B、磁性荧光碳量子点试剂、校准品、质控品、清洗液和发光底物；其中，所述磁性荧光纳米碳量子点试剂是Mn₂B₃@C@CdTe复合试剂或Fe₂B₃@C@CdTe复合试剂中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂A是包括异硫氰酸荧光素标记的幽门螺旋杆菌抗体连接物的BSA缓冲溶液。

3.根据权利要求1或2所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂B是包括碱性磷酸酶标记的幽门螺旋杆菌抗原连接物的BSA的缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂A通过下列方法制备：

S1. 采用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0~5.0mg/ml的异硫氰酸荧光素溶液；

S2. 向幽门螺旋杆菌抗体中加入所述幽门螺旋杆菌抗体质量1.1~1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合；

S3. 用pH为8~9的碳酸盐缓冲液调节pH平衡，再用凝胶层析分离纯化值得异硫氰酸荧光素标记的幽门螺旋杆菌抗体包被抗体。

5.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂B的制备方法如下：

A1. 用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.5~5.0mg/ml的碱性磷酸酶溶液；

A2. 用幽门螺旋杆菌抗原和碱性磷酸酶分别将反应基团分别活化，然后按照摩尔比为碱性磷酸酶：幽门螺旋杆菌抗原1:1~1:3的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应；

A3. 使用pH为8~9的Tris缓冲溶液调节pH平衡，再用凝胶柱分离纯化制得碱性磷酸酶标记的幽门螺旋杆菌抗原连接物。

6.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述磁性荧光纳米碳量子点试剂是包括抗异硫氰酸荧光素抗FITC与磁性荧光纳米碳量子点与PTCA偶联物的BSA缓冲溶液。

7.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述校准品和所述质控品通过包括以下步骤的操作制备而成：在1L的含BSA缓冲液中加入0.01~0.05g四环素和0.1~0.5g的硫酸新霉素，然后加入幽门螺旋杆菌抗体并充分溶解。

8.根据权利要求1所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物是ALPS溶于缓冲溶液制备而成。

9.根据权利要求8所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒的应用方法，其特征在于，包括如下操作步骤：

B1. 分别取5~10μL校准品、质控品和待测样本；

B2. 分别向上述三种样品中加入5~10μL抗试剂A和5~10μL抗试剂B，36~38℃下水浴5min；

B3. 分别向所述步骤B2得到的三种样品中加入5~10μL磁性荧光纳米碳量子点试剂，36~38℃下水浴5min；

B4. 将所述步骤B3获得溶液在磁分离器上沉淀分离后，移除上清液，得到固体颗粒；

B5. 向所述步骤B4得到的固体颗粒倒入清洗液进行清洗，得到清洗后的固体颗粒；

B6. 向所述步骤B5中清洗后的固体颗粒中分别加入100~150μL发光底物，检测其发光强度。

10.根据权利要求9所述的一种口腔幽门螺旋杆菌检测试剂盒的应用方法，其特征在于，在进行所述步骤B6前，将所述步骤5重复1~3次。