[发明专利]一种益生菌发酵的杜仲液生产的人用的营养颗粒

权利要求书

1.一种益生菌发酵的杜仲液生产的人用的营养颗粒，其特征在于，包括如下制备方法：

S1益生菌菌种的选取：原始菌种按规定从微生物制品检定所或中国微生物研究所购买；

S2菌种分离；

S21新鲜牛心液的制备:取新鲜牛心切开，去除脂肪，筋络，筋膜，洗净后置绞肉机绞成肉末，称重，加入三倍量的纯净水浸泡，置4℃左右静置24h后，水浴蒸煮，去渣，真空抽滤备用；

S22牛奶培养基的制备:取新鲜牛奶，待乳脂析出，捞出乳脂，反复数次直至浓缩体积的3/4左右于冰箱冷藏放置再捞出析出的乳脂，然后分装到试管中，每支20m，用115℃蒸汽灭菌20min，取出冷却，置冰箱冷藏备用；

S23一级试管培养基的制备：选取蛋白胨1%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，乳糖2%，杜仲叶提取液1000ml；

将上述培养基成分置入定量的纯水杜仲叶提取液中，加热90-95℃使其溶解，调PH为6.2-6.4，每支试管分装9m，115℃灭菌20-25min放至室温，置冰箱冷臧备用；

S24固体培养基的制备：其配方配法同上，另加琼脂条1.5-2.0%加热溶化用纱布过滤分装，每支5-6m1，115℃蒸汽灭菌20-25min，趁热摆放斜面，冷却凝固后置冰箱冷藏备用；

S25菌种强化工艺流程:

经鉴别强化的菌种放入一级试管37°-39℃培养18-24h；

将一级试管0.1ml菌种放入转平皿，增菌培养37°-39℃培养48-72h；

挑选平皿菌落钩的铂金耳放入一级试管37°-39℃培养18-24h；

一级试管0.1m菌种转试管牛奶37°-39℃培养18-24h；

试管牛奶和铂金耳加入一级试管37°-39℃培养18-24h；

一级试管0.1ml菌种加入试管牛奶37°-39℃培养48-72h；

试管牛奶的白金耳加入一级试管37°-39℃培养18-24h；

一级试管0.1ml菌种加入试管牛奶37°-39℃培养48-72h；

第三次强化每样测酸度，试管牛奶强化菌种3-5次，直至酸度达到≥2.0为止；

一级试管0.1ml菌种加入试管牛奶37°-39℃培养48-72h；

试管牛奶的白金耳加入一级试管37°-39℃培养18-24h；

一级试管划S斜面数支，37°-39℃培养18-24h，冰箱冷藏每天支，即可作为生产用菌种；

S3强化菌种的酸度测定方法:取强化菌种第3-第5次的凝固牛奶5ml于三角瓶加纯水20ml摇匀，以酚酞作指示剂，0.1mol/ LNaOH滴定至呈淡粉红色即为终点，同时做空白滴定作对照，减少空白对照消耗的0.1ml/LNaOH的ml数，即为实际测定酸度；

S4菌种分离传代工艺：无菌条件下，以无菌操作法将原始菌种依次放入一级试管，牛奶试管，液体试管，平板分离，液体试管，斜面培养基，冰箱冷藏备用；

S5菌种的保藏和鉴别：

在正常生产情况下，菌种以斜面冷藏保存即可；

按部分标准规定全项鉴别，每半年进行一次，每月转接菌种一次，要做全项鉴别中的1-5项，如有不合格项目及时上报公司领导研究处理，每三个月强化菌种一次，做全项鉴别；

S6三级培养基的制备、灭菌及接种；

S61制备方法：选取蛋白胨1%，牛肉膏0.5%，氯化钠0.5%，乳糖2%，杜仲叶提取液1000ml和新鲜牛心1个；

将称量好的牛肉膏，蛋白胨，氯化钠放入杜仲叶提取液和牛心浸液的混合溶液中，加热90-95℃搅拌使其充分溶解待其溶解后，再加入称好的乳糖，用20%的NaOH溶液调节PH至6.3，然后分装到试管中，每支试管9ml，塞上棉塞，用牛皮纸包扎密封，灭菌控制灭菌温度115℃，25min，并将灭菌后一级试管待其冷却至接种温度或室温后放入冰箱冷藏备用；

S62一级试管接种，接种前将臭氧灭菌器打开30min，超净工作台紫外灯打开照射30min关闭，20min后，接种人员按照无菌操作程序进行接种，从生产斜面培养基中用接种环勾取斜面菌苔转移至一级试管，置培养箱中，37-39℃培养22-24h，培养液呈正常混浊PH值4.2-4.5即可，无菌转移二级空白三角瓶培养基中，置培养箱中37-39℃培养18-24h，每隔1小时摇瓶一次至碳酸钙几乎消失，发酵液应呈正常混浊无菌膜，无絮状物，PH4.2-4.5，活菌数10亿/ml以上，即可在无菌室转接到三级圆底烧瓶制备好的空白培养基中置培养箱或恒温培养间中，37°39℃培养16-18h，每隔1小时摇瓶一次，至瓶内碳酸钙几乎消失，有乳香气味，色泽应呈桔黄色正常混浊，PH4.5-4.7，活菌数30亿/ml以上，培养发酵好的三级圆底烧瓶亦可及时转不锈钢发酵罐；

S63不锈钢发酵罐发酵好的培养液，通过105型筒式高速离心机进行菌液分离，高速离心后的菌泥制备浓菌粉，离心液经减压浓缩和喷雾干燥，制得甘露聚糖肽粗粉；

S64将上述所得甘露聚糖肽粗粉，置于200L槽型混合机，适量加入粘合剂和崩解剂，制成适宜软材，再经14目筛网，制成干湿适宜的颗粒，低温沸腾干燥后，最后经12目筛网进行整粒，样品抽检合格后，进行分装和包装，同时附上每批的批生产记录和质检部门签发化验报告，打包入库。

2.根据权利要求1所述的一种益生菌发酵的杜仲液生产的人用的营养颗粒，其特征在于，所述步骤S22的新鲜牛奶为无药物抗菌素残留，未添加任何防腐剂和兑水掺假的新鲜牛奶，并采用电热隔水加热煮沸后，稍停片刻。