[发明专利]一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法

说明书

本发明提供了一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，属于功能性食品技术领域。本发明涉及到的步骤主要包括：将枯草芽孢杆菌进行活化，培养其至生长对数期形成种子液；将雄蜂蛹粉进行匀浆、调节其PH值后灭菌，将菌株接种于蜂蛹原料粉中进行发酵，发酵完成后对发酵液离心分离，过滤得到粗多肽液，最后粗肽液先进行超滤分离，再进行超滤脱盐，经过浓缩干燥获得抗氧化蜂蛹多肽。采用本发明的方法制备得到的蜂蛹多肽具有独特的酱香风味，可减少多肽的苦涩味的形成，并且能制备得到一定量的3ku低聚肽，具有较强的抗氧化活性。

技术领域

本发明涉及功能性食品技术领域，尤其涉及一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法。

背景技术

雄蜂蛹是蜜蜂雄性幼虫封盖后到羽化出房前这一变态时期的营养体，在实际应用中作为蜂王浆生产的一种农副产品。雄蜂蛹蛋白质含量丰富，含有多种微量元素和维生素，有资料显示雄蜂蛹干物质中粗蛋白含量约41%~60%，可以作为一种优质的蛋白质食品。

蛋白质作为人体六大营养素之一，主要通过消化系统中的蛋白酶水解为小分子肽为人体吸收。因此，多肽相比于蛋白质具有更高的生物利用率，能更好的发挥出其健康效应。目前，国内外主要采用酶解法的方式对蜂蛹蛋白进行更深一步的开发利用。例如中国发明专利CN201711370239.8公开了一种酶解制备雄蜂蛹小分子抗氧化肽的方法，利用内切酶（碱性蛋白酶或中性蛋白酶）和外切酶（风味蛋白酶）复合酶解的方式获取粗肽，再进行粗滤和超滤获得分子量1ku的小分子多肽。但是酶解法制备蜂蛹多肽往往成本很高，而微生物发酵法更加经济节约，此外，微生物来源广泛且繁殖较快，可产生多种酶系，一定程度上可避免肽制品苦味的产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用微生物发酵制备蜂蛹多肽的方法，采用本发明可获得分子量低于3ku的抗氧化蜂蛹多肽。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

1）将枯草芽孢杆菌菌液划线于LB琼脂培养基，一定温度下培养24h，挑取生长状况良好，形态大小正常的单菌落接种到液态培养基中，一定温度下摇瓶培养14h，获得枯草芽孢杆菌的种子液。所述培养温度为35℃~38℃，所述摇瓶转速140r/min~180r/min；

2）将雄蜂蛹粉与正己烷混合，采用索氏提取法进行脱脂；

3）将步骤2）中脱脂蜂蛹粉与水匀浆，调节其PH值为7~8，对其进行高压蒸汽灭菌；

4）将步骤1）中种子液接种于步骤3）的蜂蛹匀浆，在35℃~38℃条件下摇瓶发酵36h，得到发酵液。所述摇瓶转速140r/min~180r/min；

5）将步骤3）中得到的发酵液灭酶后，进行离心分离，将得到的上清液过滤，收集滤液，所述离心分离的转速为8000~10000rpm，所述灭酶温度为95℃~100℃；

6）将步骤4）中得到的滤液首先进行超滤分离，获得3ku的超滤多肽液。所述超滤分离的超滤膜截留分子量为10ku、5ku以及3ku；

7）将步骤5）中得到的分子量3ku蜂蛹多肽液进行超滤脱盐，收集截留液，所述超滤脱盐的滤膜截留分子量为0.15~0.3ku；

8）将所述步骤6)中得到的截留液减压浓缩，真空冷冻干燥获得具有抗氧化蜂蛹多肽。

优选的，所示步骤1）中摇瓶培养种子液的时间为12h-14h；

优选的，所述步骤2）中索氏脱脂的时间为8-10h；

优选的，所述步骤3）脱脂蜂蛹粉的粒度10~80μm；

优选的，所述步骤3）中蜂蛹匀浆装瓶量为（40~60）mL/250mL；

优选的，所述步骤3）脱脂蜂蛹粉与水的匀浆比例为1g：(15~20)mL；