[发明专利]一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征是，包括：

1）将枯草芽孢杆菌菌液划线于琼脂培养基，一定温度下培养24h，挑取生长状况良好，形态大小正常的单菌落接种到液态培养基中，一定温度下摇瓶培养12h，获得枯草芽孢杆菌的种子液，所述培养温度为35℃~38℃，所述摇瓶转速140r/min~180r/min；

2）将22日龄~23日龄蜂蛹冻干，磨成粉末，雄蜂蛹粉与正己烷混合，采用索氏提取法进行脱脂；

3）将步骤2）中脱脂蜂蛹粉与水匀浆，调节其PH值为7~8，对其进行高压蒸汽灭菌；

4）将步骤1）中种子液接种于步骤3）的蜂蛹匀浆，在35℃~38℃条件下摇瓶发酵36h，得到发酵液；所述摇瓶转速140r/min~180r/min；

5）将步骤3）中得到的发酵液灭酶后，进行离心分离，将得到的上清液过滤，收集滤液，所述离心分离的转速为8000~10000rpm，所述灭酶温度为95℃~100℃；

6）将步骤4）中得到的滤液首先进行超滤分离，获得3ku的超滤多肽液，所述超滤分离的超滤膜截留分子量为10ku、5ku以及3ku；

7）将步骤5）中得到的分子量3ku蜂蛹多肽液进行超滤脱盐，收集截留液，所述超滤脱盐的滤膜截留分子量为0.15~0.3ku；

8）将所述步骤6)中得到的截留液减压浓缩，真空冷冻干燥获得具有抗氧化蜂蛹多肽。

2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤1）中摇瓶培养种子液的时间为12h-14h。

3.根据权利要求1所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤2）中索氏脱脂的时间为8-10h。

4.根据权利要求1或3所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤3）脱脂蜂蛹粉的粒度10~80μm。

5.根据权利要求1所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于,所述步骤3）中蜂蛹匀浆装瓶量为（40~60）mL/250mL。

6.根据权利要求1或4所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤3）脱脂蜂蛹粉与水的匀浆比例为1g：(15~20)mL。

7.根据权利要求1的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤3）中高压蒸汽灭菌温度为110℃~115℃，时间为15min~20min；灭菌后的蜂蛹匀浆颜色会加深，同时伴随出现部分沉淀，属正常灭菌现象。

8.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4）中蜂蛹匀浆与种子液的接种比例为100mL：（2~3）mL。

9.根据权利要求1所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤4）中发酵时间32h~48h。

10.根据权利要求1所述的一种微生物发酵制备蜂蛹抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤5）离心分离的时间为10~12min。