[发明专利]一种用于检测蜡样芽孢杆菌的液相芯片及应用

权利要求书

1.可用于连接在标记有不同荧光染料磁性微球上的DNA探针，其特征为：从蜡样芽孢杆菌G6235、G6206、G6239、G2724、G6211、G6217、G6207、G6214的wzm基因中分别选取的一种DNA片段，其探针序列依次如SEQ ID NO: 1-8所示。

2.权利要求1所述可用于连接标记有不同荧光染料磁性微球上的任意1种或几种DNA探针在制备用于检测8种蜡样芽孢杆菌中至少一种菌悬液芯片方面的应用。

3.含有权利要求1所述的DNA探针的悬液芯片制备方法，主要包含以下步骤：

（1）在蜡样芽孢杆菌G6235、G6206、G6239、G2724、G6211、G6217、G6207、G6214的wzm基因内部，设计并制备用于多重PCR的DNA引物，每个血清型的引物包含上、下游引物各1对，且下游引物利用生物素基团进行标记；所述的引物序列依次如SEQ ID NO: 9-24所示；

（2）在蜡样芽孢杆菌G6235、G6206、G6239、G2724、G6211、G6217、G6207、G6214的wzm基因内部设计并制备DNA探针， 每条DNA探针在基因上的位置均位于对应的上、下游引物之间，每条DNA探针在5'末端均加入15个胸腺嘧啶核苷酸（dT）作为连接臂，并在连接臂末端加入氨基基团进行修饰，以便与带有羟基基团的标记有荧光染料的磁性微球进行偶联；

（3）利用步骤（2）的DNA探针与不同荧光染料磁性微球进行偶联；

（4）制备待检测样品的基因组DNA，利用步骤（1）制备的引物，进行多重PCR扩增；

（5）利用步骤（4）获得扩增产物与步骤（3）获得的偶联微球的DNA探针进行杂交和染色；

（6）将步骤（5）获得的染色后的杂交产物利用Bio-Plex 200悬液芯片系统进行检测。