[发明专利]一种多功能抗GFAP单克隆抗体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种多功能抗GFAP单克隆抗体，其特征在于，其含有由SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示的CDR1、由SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：5所示的CDR2以及由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：6所示的CDR3。

2.根据权利要求1所述的多功能抗GFAP单克隆抗体，其特征在于，该抗体可以特异性识别GFAP蛋白。

3.根据权利要求1所述的多功能抗GFAP单克隆抗体，其特征在于，该抗体可以应用于抗体验证。

4.一种制备权利要求1所述的多功能抗GFAP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，进行鼠单抗制备，首先快速将细胞冻存管从液氮罐中取出，置37℃恒温水浴锅内快速摇晃至细胞融化；

S2，加入5mL的DMEM培养基混匀，在超净台操作，1200rpm离心5min，弃上清，加入20％完全培养基，37℃5％CO₂培养箱内培养，传代培养；

S3，进行腹水制备；

S4，抗体纯化；

S5，进行重组抗体制备，首先进行RNA提取，复苏细胞，然后检测细胞株效价，采用半皿或者1/4皿收集细胞；

S6，加1mlTrizol，吹匀至细胞完全溶解，然后加入200μl氯仿，上下剧烈颠倒，静置2min，在12000rpm 4℃15min离心取上清；

S7，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，静置10min；然后12000rpm4℃10min离心，弃上清；

S8，加1ml预冷75％乙醇，轻弹管底，12000rpm 4℃3min离心，弃上清，室温晾干数分钟，然后加30-50μl预冷的DEPC水至溶解即得到RNA产物，-80℃长期保存；

S9，进行cDNA制备，然后进行质粒制备；

S10，抗GFAP重组抗体表达及纯化，包括转染前细胞培养、转染细胞的准备、瞬时转染和产物表达与检测；

S11、进行抗体验证。

5.根据权利要求4所述的多功能抗GFAP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S5-步骤S8中整个提取过程必须带口罩与手套，防止RNase的污染。

6.根据权利要求4所述的多功能抗GFAP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S11中抗体验证的方法包括：WB验证、IF验证、FC验证、IHC验证。

7.一种采用权利要求1所述的多功能抗GFAP单克隆抗体的应用。