[发明专利]净化黑臭水体复合生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种净化黑臭水体复合生物菌剂，以重量份数，包括如下成分，其特征在于：枯草芽孢杆菌50~60份、产甲烷菌30~35份、除臭植物液75~100份、硫细菌50~75份、硝化菌50~75份、巴斯德毕赤酵母45~50份、芽孢杆菌株100~120份、培养液1000~2000份、em菌液500~600份。

2.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的产甲烷菌采用在液面加石蜡的液体中进行深层培养法，且产甲烷菌采用厌氧手套箱进行制备工艺，且产甲烷菌采用革兰氏阳性菌作为成分。

3.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的除臭植物液采用植物叶片果实、树皮、树根、芽、种子中提取的植物液体，且所述除臭植物液包括萜烯类，醛、醇和酮的直链化合物，乙酸苄酯，香草醛，肉桂酸和甲酸香叶酯。

4.根据权利要求3所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的萜烯类采用蒎烷和薄荷烷，所述的醛、醇和酮的直链化合物采用葵醇和叶桂醇中提取的可挥发的植物油。

5.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的硫细菌采用不产色素的好氧化能营养菌，所述的巴斯德毕赤酵母采用较温和的纯化方式来纯化目的蛋白，采用硫酸铵沉淀，再通过离子交换，凝胶过滤层析，疏水层析的方法进一步纯化蛋白。

6.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌株采用蜡状芽孢杆菌，在温度为28-37℃下从多种食品中分离出蜡状芽孢杆菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点，进行提取培育。

7.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的培养液采用完全无机盐培养液，包括如下成分，硝酸钙1g，磷酸二氢钾0.25g，硫酸镁0.25g，氯化铁0.25g，氯化钾g，1L蒸馏水。

8.根据权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的em菌液的成分采用光合细菌、乳酸菌、放线菌和酵母菌。

9.根据权利要求8所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂，其特征在于：所述的光合细菌采用含有叶绿素a、以水作为供氢体和电子供体、通过光合作用将光能转变成化学能、同化CO2为有机物质的光合细菌，所述的乳酸菌采用植物源乳酸菌，所述的放线菌采用形态为孢子类细菌，所述的酵母菌采用植物类分泌酵母。

10.权利要求1所述的一种净化黑臭水体复合生物菌剂的制备方法，具体包括如下步骤：

步骤一：取亲本菌株T4412、TT2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基的试管中，36℃振荡培养14h；

步骤二：T4412、TT2各取1ml菌液转接入装有20ml液体完全培养基的250ml锥形瓶中，36℃振荡培养3h，使细胞生长进入对数前期；

步骤三：T4412、TT2各加入25u/ml青霉素，使其终浓度为0.3u/ml，继续振荡培养2h；

步骤四：T4412、TT2各取菌液10ml，4000r/min离心10min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心，重复洗涤两次，将菌体悬浮10ml的SMM中，每ml的SMM中含108～109活菌；

步骤五：T4412、TT2各取菌液0.5ml，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7各1ml，倾注完全培养基，36℃培养24h后计数；

步骤六：二株亲本菌株各取5ml菌悬液，加入5ml溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100ug/ml，混匀后于36℃水浴保温处理30min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000r/min离心10min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5ml高渗缓冲液中，制得枯草芽孢杆菌；

步骤七：将并涂布平板1/5~1/3区域，使用接种环交叉划线涂布区域使形成单菌落。