[发明专利]一种同时测定热反应香料中10种极性杂环胺的方法

说明书

本发明涉及一种同时测定热反应香料中10种极性杂环胺的方法，本发明方法具有操作简单、省时高效、仪器配置简单、分析成本低等优点，适宜相关企业进行产品质量监控，也可作为相关行业标准建立的参考。

技术领域

本发明涉及食品香料检测领域，具体涉及一种热反应香料中极性杂环胺的检测方法。

背景技术

杂环胺化合物(Heterocyclic amines,HAs)由碳、氢及氮原子组成，具有杂环芳香族结构的化合物。此类化合物经常发现于经热处理过的高蛋白食品中。杂环胺是烹调富含蛋白质的食物过程中由蛋白质或氨基酸热解产生的一类具有致癌、致突变作用的多环芳香族化合物，其致突变性相当于迄今检测到的最有突变活力的毒物的水平。也已证明，正常烹调食品中均含有不同量的杂环胺。

HAs的生成方式主要为两类，第一类是由四种前驱物，即葡萄糖、氨基酸、肌酸(creatine)和肌酐酸(creatinine)经热反应而成的IQ型HAs，如IQ、MeIQ、IQx、MeIQx、7,8-DiMeIQx、4,8-DiMeIQx、PhlP等，这类化合物一般在普通家庭烹调温度(100-225℃)时就可形成；第二类为直接由单一氨基酸和蛋白质裂解生成的carboline型HAs，如Glu-P-1、Glu-P-2、Trp-P-1、Trp-P-2、AaC、MeaAaC等，这类化合物一般在300℃以上的高温时形成。而食品中的HAs生成量，主要取决于食品种类、加工方式、加热温度及时间，其中又以加热温度和时间为主要的影响因子，加热温度越高，时间越长，生成的HAs越多。

热反应香料是一种由食品原料和(或)允许在食品或反应香精中添加的原料加热制备而成的产物。反应香精制备时的反应温度一般不能超过180℃，在180℃的条件下反应一定时间，因此热反应香料的加工过程可能生成IQ型的HAs，因此研究热处理反应香料中IQ型的HAs对于食品安全性就尤为重要。

2016年8月国家发布《食品安全国家标准高温烹调食品中杂环胺类物质的测定》国标方法，并于2017年3月正式实施，标准适用于烤鱼、烤肉及其制品中MeIQ、MeIQx、4,8-DiMeIQx、7,8-DiMeIQx、PhIP的测定，样品采用氢氧化钠-甲醇溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱检测。其中，固相萃取柱为一次性器具，不可重复使用，因此成本较高；同时实验过程较为繁琐、费时。液相色谱-串联质谱价格较高，应用具有一定局限，目标检测物极性杂环胺数量较少。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术的不足，提供一种同时测定热反应香料中10种极性杂环胺的方法；本发明方法建立一整套回流提取-高效液相色谱同时测定热反应香料中10种IQ型杂环胺类物质含量的分析方法。本发明方法具有操作简单、省时高效、仪器配置简单、分析成本低等优点，适宜相关企业进行产品质量监控，也可作为相关行业标准建立的参考。

本发明采用的技术方案为：

一种同时测定热反应香料中10种极性杂环胺的方法，该方法包括如下步骤：

1)、热反应香料中10种极性杂环胺的提取净化方法

准确称取5g反应香料于250mL圆底烧瓶中，加入5g硅藻土，加入50mL盐酸溶液(2mol/L)、10mL乙醇加热回流1h；得到的溶液冷却后过滤，用饱和NaOH溶液调节pH≥9；移入250mL分液漏斗中，用25mL二氯甲烷(含5％甲苯)萃取，加入0.5g硅藻土，振摇10min，静置分层，过滤，重复萃取两次，合并二氯甲烷，6000r/min离心10min；在旋转蒸发仪上，挥干溶剂；用甲醇定容到1mL；用0.2μm的滤膜过滤，得到清澈透明的溶液，然后HPLC分析。

2)、高效液相色谱法同时测定10种极性杂环胺的方法