[发明专利]一种荧光微球活化剂复溶液及其应用

说明书

本发明涉及一种荧光微球活化剂复溶液及其应用，所述活化剂复溶液用于溶解EDC和NHS，由二甲基亚砜溶解配制的浓度20～100mM的MES缓冲液和质量浓度0.5～2％的表面活性剂S22 CHCMAL LA‑9组成。本发明的活化剂复溶液，不仅减缓了EDC和NHS的水解速度，增强了活化剂的稳定性和活化效率；并且还显著增强了活化后的荧光微球的稳定性，使其可在2‑8℃稳定保存至少65天，并增强了检测灵敏度。将本发明所述的活化剂复溶液应用于荧光微球活化和荧光微球免疫层析试纸条制备中，不仅操作方便，节省时间，适用范围广泛，标记工艺更加稳定，同时有效控制了批间差，适合大规模生产使用。

技术领域

本发明属于生化检测试剂技术领域，具体涉及一种荧光微球活化剂复溶液及其应用。

背景技术

荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型双抗夹心免疫层析方法，即待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合形成双抗夹心的“三明治”型。

时间分辨荧光微球作为一种特殊的功能微球，每个微球中可能包裹成千上万个荧光分子，可大大提高荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度；同时荧光微球表面修饰有合适密度的羧基或其他功能基团，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高了标记物的稳定性。在荧光微球与蛋白或者抗体共价偶联之前，微球羧基的活化是极其关键的一步，利用EDC和NHS作为交联剂活化微球羧基是常用的采用的一种方法。传统工艺中溶解化学试剂EDC和NHS时一般使用的是超纯水，然而由于EDC和NHS在水中容易水解，因此需要现配现用，并且微球的羧基与EDC和NHS反应后形成酰胺键，使微球处于一种激发状态，极其的不稳定，需要立即与蛋白或者抗体共价偶联，否则微球将会影响共价偶联的效果。因此每次进行活化步骤时都需重新配置EDC和NHS溶液，操作十分不方便，并且活化后的微球不稳定会影响活化效率进而影响检测成品试纸条的批间差和灵敏度。

发明内容

本发明针对现有技术存在的缺陷，提供了一种荧光微球活化剂复溶液及其应用，通过特殊选取表面活性剂S22 CHCMAL LA-9，将其与二甲基亚砜配置的MES缓冲液复配作为活化剂复溶液用于溶解EDC和NHS，进而用于活化微球，从而得到了一种活化效率高，操作方便，且稳定性和灵敏度显著增强的荧光微球免疫层析试纸条，并且批间差得到有效控制，适合大批量生产使用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种荧光微球活化剂复溶液，所述活化剂复溶液用于溶解EDC和NHS，所述活化剂复溶液由浓度20～100mM MES缓冲液和质量浓度0.5～2％的表面活性剂S22 CHCMAL LA-9组成，其中所述MES缓冲液由二甲基亚砜溶解MES配制而成。

本发明使用了一种活化剂复溶液，以替代传统使用的超纯水，用于溶解活化剂EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)制成活化剂，通过特殊选取表面活性剂剂S22 CHCMAL LA-9，使其与MES缓冲液和二甲基亚砜产生协同作用，可以减缓EDC和NHS的水解速度，使活化剂更加稳定，利于长期保存使用。将该活化剂用于荧光微球的活化也可显著增强活化效率和活化后荧光微球的稳定性，其中表面活性剂剂S22CHCMAL LA-9可使荧光微球分布更加均一，显著增强荧光微球的稳定性和偶联效率，进而显著增强了试剂的灵敏度。

进一步的，所述活化剂复溶液由浓度50mM MES缓冲液和质量浓度1％的表面活性剂S22 CHCMAL LA-9组成。通过对缓冲液和表面活性剂的浓度进行优化，得到了一种稳定性和灵敏度最优的活化剂复溶液。

本发明还提供了所述活化剂复溶液在荧光微球活化中的应用。