[发明专利]一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法

权利要求书

1.一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)收集有肺腺癌原发灶且出现胸水转移的病例，留取未经固定的新鲜血性体液样本；

(2)立即去除样本中肉眼可见的蛋白和血凝块后对样本进行摇匀并离心，观察上清液与沉淀物的分层情况；

(3)对有出现分层的样本观察沉淀物大小及移动情况；出现分层时，当沉淀物小于2mL，取全部管底沉淀物，当沉淀物大于2mL且固定在管底不移动时，取沉血表面物；

(4)经过步骤(3)分层沉淀处理后，出现分层时，取会移动的沉淀物与破红液按照1:1～4的体积比进行混匀破红后取破红析出物；不出现分层时，选取无法分层的样本与与破红液按照1:1～4的体积比进行混匀破红后取破红析出物；

(5)取经过步骤(3)获得的管底沉淀物、沉血表面物以及经过步骤(4)获得的破红析出物分别制成细胞蜡块；

(6)经过步骤(5)制得的细胞蜡块切片，行苏木素伊红染色及I免疫细胞化学染色及分子病理检测。

2.如权利要求1所述的一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于：所述步骤(4)中破红液为体积分数为10％的中性缓冲福尔马林溶液与50％的乙醇溶液按照体积比为1:1～2的混合液。

3.如权利要求1所述的一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于，所述步骤(5)中制备细胞蜡块具体包括以下步骤：

A1、在管底沉淀物、沉血表面物和破红析出物中加入固定液，吹打混匀后静置5～10min，再离心分离，去上清液留取沉淀物；

A2、在经过步骤A1取得的沉淀物中加入过渡凝集液，吹打混匀后静置5～10min，再离心分离，去上清液留取沉淀物；

A3、沿着装有沉淀物的离心管的侧壁缓慢的加入有伊红标记的成块凝集液进行沉淀物凝集并静置2～3h；

A4、取经过步骤A3成块凝集于离心管管底的凝集沉淀物，并用棉纸包被，脱水机脱水后浸蜡包埋制成细胞蜡块。

4.如权利要求3所述的一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于：所述步骤A1中固定液为体积分数为10％的中性缓冲福尔马林溶液，固定液的加入量30-50ml。

5.如权利要求3所述的一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于：所述步骤A2中过渡凝集液为体积分数为75％的乙醇溶液，过渡凝集液的加入量30-50ml。

6.如权利要求3所述的一种用于血性体液样本肿瘤细胞的离心分层富集法，其特征在于：所述步骤A3中成块凝集液为体积分数为95％的乙醇溶液，过渡凝集液的加入量30-50ml。