[发明专利]抗牛结节性皮肤病病毒的抗体、检测试纸及试剂盒

说明书

本发明涉及特异性结合牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease，LSD)的抗体或其活性片段、包括所述抗体的胶体金免疫层析检测试纸或试剂盒及其制备方法和应用。本发明的检测试纸或试剂盒生产方便，效果稳定，无非特异反应，包被量低，有利于大批量生产。本发明所提供的牛结节性皮肤病病毒的检测方法操作简便，重现性好，在LSD的现场快检领域实现了突破，丰富了现有的LSD检测方法。

技术领域

本发明涉及免疫领域，具体涉及抗牛结节性皮肤病病毒的抗体以及检测牛结节性皮肤病病毒的检测试纸及试剂盒。

背景技术

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease，LSD)，是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的一种牛的急性、亚急性接触性传染病，该病发病率在5％至45％之间，病死率最高可达10％。LSDV属于痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科山羊痘病毒属，与绵羊痘病毒和山羊痘病毒的基因组的同源性高达96％。该病是世界动物卫生组织(英语：World Organization forAnimal Health；法语：Office international desépizooties,OIE)的通报性疾病(OIE2014年版名录)，是《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》确定的一类传染病，该病的发生可以引起产奶量暂时性下降，引起公牛暂时或永久性不育，损坏皮张，甚至因为继发细菌感染而导致动物死亡，在世界范围内已造成巨大的经济损失。LSD于2019至2020年间传入我国多个省区，给当地造成巨大的经济损失，同时也给我国的防控工作带来一定的压力，快速有效的防控、检测、鉴别牛结节性皮肤病病毒是当前的工作重点。

目前，牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease，LSD)的检测方法主要有分离培养鉴定法、聚合酶链式反应(PCR)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法，免疫荧光、琼脂免疫扩散、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。由于分离培养鉴定法操作繁琐、费时，PCR法和FQ-PCR及其他上述方法需要昂贵的仪器和试剂，检测成本高，不适合基层单位实验室和现场检测应用。

发明内容

本发明的第一目的在于提供特异性结合牛结节性皮肤病病毒的抗体或其活性片段。

具体而言，本发明提供的抗体或活性片段可以与牛结节性皮肤病病毒中的核心蛋白P32特异性结合。本发明通过分析比对LSDV毒株和疫苗株氨基酸序列，发现P32蛋白的氨基酸序列相对保守，且具有较好的免疫原性，所以选择P32蛋白作为靶标检测LSD。所述抗体或活性片段包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区；其中：

所述重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2和/或SEQID NO:3所示的CDR3；或者，所述重链可变区具有SEQ ID NO:7所示的CDR1，SEQ ID NO:8所示的CDR2和/或SEQ ID NO:9所示的CDR3；

所述轻链可变区具有SEQ ID NO:4所示的CDR1，SEQ ID NO:5所示的CDR2和/或SEQID NO:6所示的CDR3；或者，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:10所示的CDR1，SEQ ID NO:11所示的CDR2和/或SEQ ID NO:12所示的CDR3。

作为本发明的一种优选方案，所述抗体中，重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2和/或SEQ ID NO:3所示的CDR3；所述轻链可变区具有SEQ IDNO:4所示的CDR1，SEQ ID NO:5所示的CDR2和/或SEQ ID NO:6所示的CDR3。

作为本发明的一种优选方案，所述抗体中，所述重链可变区具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。