[发明专利]一种长臂活化生物素分子标记抗原及其制备方法、应用

说明书

本发明提供了一种长臂活化生物素分子标记抗原及其制备方法、应用，其中长臂活化生物素为使用长臂活化生物素标记抗原能使检测灵敏度和特异性有很大程度的提高。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，尤其是涉及一种长臂活化生物素分子标记抗原及其制备方法、应用。

背景技术

近年来，利用生物素(biotin)与亲和素(avidin)之间的亲和作用，以及他们之间既可偶联抗原、抗体等大分子生物活性物质，又可被酶等多种材料所标记的特性，研制一种新型生物反应放大系统，即生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin Systerm)，并建立了多种高灵敏度，高特异性，高稳定性，方便、经济和快速的生物反应监测和分离纯化。

而现有的生物素标记抗原，在抗体检测的时候，存在灵敏度不足，阳性率低的缺点，存在漏检或误检等风险，均无法达到要求。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种长臂活化生物素分子标记抗原及其制备方法、应用，以克服现有技术的不足。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种长臂活化生物素分子标记抗原，所述长臂活化生物素为以下结构式中的一种，

(臂长29)；或(臂长21.7)或(臂长24.7)。

优选的，抗原为HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)重组抗原。

一种制备如上所述的长臂活化生物素分子标记抗原的方法，取0.5mg-1mg HBsAg重组抗原，用0.01M-0.05M pH＝8.5-10.5硼酸盐溶液在2～8℃下进行透析1～3h，将透析后的抗原加入25-40μg长臂活化生物素，同时加入二甲基亚砜，使二甲基亚砜最终质量浓度为5～10％，缓慢振荡，避光反应3-6h，在上述溶液中加入250-400μL 1-5M氯化铵溶液，常温避光反应30～60min；用0.01-0.05M PBS溶液在2～8℃下透析12-24h，期间换液3～5次。

本发明还提供如上所述的长臂活化生物素分子标记抗原，或如上所述制备方法制备的长臂活化生物素分子标记抗原在制备乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂中的应用。

本发明提供一种乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒，包括如权利要1或2所述的长臂活化生物素分子标记抗原、链霉亲和素偶联的磁微粒悬浮液以及辣根过氧化酶标记的重组抗原。

优选的，所述链霉亲和素偶联磁微粒悬浮液的制备包括如下步骤，取100-200ml0.1-0.5M 2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液，加入10-30mg表面偶联有羧基和氨基的磁微粒，室温搅拌40-60min，之后加入3.5-6.0mg链霉亲和素，然后加入8-15mg/ml碳二亚胺溶液(EDC)，2～8℃反应1-4h后，用0.01-0.05M PBS溶液在2～8℃透析12～24h，期间换液3-5次。

优选的，辣根过氧化酶标记重组抗原的制备步骤如下，

1)将待标记的原料0.5mg-1mg HBsAg重组抗原放入透析袋中，用0.01-0.05M pH＝8.5-10.5的硼酸盐缓冲液中透析1-3h；

2)将上述透析过的HBsAg重组抗原与活化的辣根过氧化酶按质量比为1:(1-3)进行标记，即1mg抗原用1-3mg酶标记；将上述溶液充分混合后进行透析，透析换缓冲液使用pH＝9.5±0.5的碳酸盐缓冲液，置于2-8℃避光透析12-24h，期间更换2-3次透析缓冲液；

3)取出透析好的原料，配制浓度为1-5mg/ml的NaBH₄，按照1mg原料中加入100-400ul NaBH₄比例进行混合，2-8℃避光反应2-4h；

4)将上述完成的标记原料用0.01-0.05M PBS置于2-8℃透析12-24h，并加入等体积甘油，保存备用。