[发明专利]一种胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备方法

说明书

本发明提供了一种胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备方法，以解决胎盘羊膜间充质干细胞的分离效率低、操作复杂、成本高的问题。所述分离制备方法步骤包括用手将羊膜沿脐带和胎盘连接处从胎盘上剥离，用清洗液清洗，再用浓度含量75％的酒精漂洗；消毒过的手术剪将漂洗过的羊膜剪碎至1cm²的羊膜组织块后，再用清洗液清洗一次后羊膜组织放入试管中加入胰酶处理；将胰酶处理过的羊膜组织用清洗液清洗后剪碎放入离心管中，加入胶原酶I和DNase I和生理盐水震荡消化；震荡消化后加入生理盐水离心，弃上清；离心后的细胞加入新鲜培养基接种于培养瓶中培养。本发明使胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备分离效率高，操作简单，成本低。

技术领域

本发明属于干细胞分离制备领域，特别涉及一种胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备方法。

背景技术

胎盘间充质干细胞是一种多能干细胞，是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞像APSC多能细胞。在胚胎发育中来源于中胚层。在机体正常的组织损伤修复过程中，MSC是一种重要的参与组织再生的细胞库。在组织损伤引起的特殊信号作用下，MSC迁移到受损部位，在局部聚集增殖，依据不同的损伤信号沿着不同途径分化。MSC易于分离扩增，体外倍增能力旺盛，即使扩增1亿倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一种实用的组织修复种子细胞。

胎盘间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为：上皮干细胞、神经干细胞、肝干细胞，肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。可以用来修复受损或病变的组织器官，治疗心、脑血管疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、骨组织病、角膜损伤、烧伤烫伤、肌病等多种疾病。具有免疫调节作用，通过负性免疫调节功能，抑制机体亢进的免疫反应，使机体免疫功能恢复平衡，从而可以用来治疗造血干细胞移植之后的免疫排斥反应以及克隆氏病、红斑狼疮，硬皮病等自身免疫系统疾病。

胎盘间充质干细胞是人体微环境的重要组成部分，移植间充质干细胞可以改变造血微环境，重建免疫系统，促进造血功能恢复，与造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等的治疗效果。

目前现有技术胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备存在分离效率低、操作复杂、成本高的问题。

发明内容

为了解决胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备存在分离效率低、操作复杂、成本高的问题，本发明提供了一种胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备方法，使胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备分离效率高，操作简单，成本低。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

本发明提供了一种胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备方法，包括如下步骤：

步骤S1，将胎盘放置在处理盘中，用手将羊膜沿脐带和胎盘连接处从胎盘上剥离，用清洗液清洗，再用浓度含量75％的酒精漂洗；

步骤S2，用浓度含量75％的酒精消毒过的手术剪将漂洗过的羊膜剪碎至1cm²的羊膜组织块后，再用清洗液清洗一次，将清洗后的羊膜组织放入试管中加入胰酶，在35-37℃温度下处理20-30分钟；

步骤S3，将胰酶处理过的羊膜组织用清洗液清洗后剪碎至1-2mm²羊膜组织块放入离心管中，每管放置8ml羊膜组织，加入胶原酶I和DNaseI和生理盐水，在35-37℃下150rpm震荡消化50-60分钟；

步骤S4，震荡消化后加入适量生理盐水，在35-37℃温度下1300rpm离心5分钟，弃上清；

步骤S5，离心后的细胞加入10ml新鲜培养基接种于培养瓶中，将培养瓶放在CO₂培养箱中培养。

作为优选，步骤S3中离心管中胶原酶I的浓度为0.1％，DNaseI的浓度为0.02％。