[发明专利]一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种CYFRA21‑1测定试剂盒及其制备方法，将氯甲基磁珠包被CYFRA21‑1捕获抗体，获得磁珠包被抗体复合物，将所述磁珠包被抗体复合物使用磁珠稀释液稀释后获得试剂M；将CYFRA21‑1检测抗体使用还原剂溶液处理，获得活化后的抗体；碱性磷酸酶用酶活化剂活化，获得活化后的碱性磷酸酶；将所述活化后的抗体与所述活化后的碱性磷酸酶反应，获得酶标抗体复合物；将所述酶标抗体复合物使用酶标稀释液稀释后获得试剂R。本发明通过用氯甲基磁珠一步法包被捕获抗体，用还原剂处理断开检测抗体重链间二硫键后用碱性磷酸酶标记的方法来提高化学发光法检测CYFRA21‑1的线性范围和准确性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

细胞角蛋白19片段(Cytokeratin-19-fragment CYFRA21-1)是病理条件下肺泡上皮细胞凋亡时，其细胞中含有的角蛋白的碎片降解后变成可溶性物质而进入血液，使血中含量增高。病理条件其可溶性片段(CYFRA21-1)释放入血并可与两株单克隆抗体KS19.1和BM19.21特异性结合，是检测非小细胞肺癌的首选肿瘤标志物。

CYFRA21-1主要用于监测非小细胞性肺癌(NSCLC)的病程，肺癌的临床诊断主要根据临床症状、影像学或内镜检查和外科手术，肺部不能明确诊断的病灶，如果伴有CYFRA21-1检测结果的增高(30ngl ml),预示患原发性支气管肺癌的可能性相当高；血清高水平的CYFRA21-1提示肿瘤晚期和预后较差；血清CYFRA21-1水平正常或轻微上升，不能排除肿瘤存在的可能；患者治疗中，血清CYFRA21-1水平快速下降到正常范围内提示治疗有，血清CYFRA21-1水平持续性保持、轻微改变或缓慢下降提示肿瘤可能切除不完全，在疾病进展过程中CYFRA21-1水平的升高往往早于临床症状及影像学检查，对非小细胞肺癌(NSCLC)的早期诊断、疗效监测和预后判断均有重要意义。

目前检测CYFRA21-1的方法主要是酶联免疫吸附法和化学发光免疫分析法，CN106483298A公开了一种用于检测细胞角蛋白19片段的化学发光免疫试剂盒，该试剂盒的灵敏度为0.03ng/ml；线性系数：r≥0.9990，线性范围：0.10-16ng/ml；其线性范围较窄，无法满足临床需求。

因此，如何开发一种能够提高化学发光法检测CYFRA21-1的线性范围的CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法，通过用氯甲基磁珠一步法包被捕获抗体，用还原剂断开检测抗体重链间二硫键后用碱性磷酸酶标记的方法来提高化学发光法检测CYFRA21-1的线性范围。

为了实现上述目的，本发明提供了一种磁珠抗体复合物的制备方法，所述方法包括：

根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述氯甲基磁珠质量和所述CYFRA21-1捕获抗体质量的比值为1:(0.02-0.1)。

进一步地，所述还原剂选自DTT、TCEP、MEA。

更进一步地，所述还原剂配方为：10～100mM PBS，10～100mM DTT；所述CYFRA21-1检测抗体质量与所述还原剂溶液质体积的比值为(0.5～1)mg：1mL。

进一步地，，所述酶活化剂的配方为：10～100mM Tris，0.2～0.6％NaCl，2～10mMEDTA，10～50mM SMCC交联剂。

进一步地，所述碱性磷酸酶质量与所述酶活化剂体积的比值为(0.5～1)mg：0.5mL；所述活化后的碱性磷酸酶与所述抗CYFRA21-1检测抗体的质量比为(0.5-0.8):1；