[发明专利]一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法，具体通过诱变、培养、筛选、分离鉴定、滴定酸度的筛选及其他性质评价六个步骤。本发明所述的高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法工艺简单、成本低；筛选得到的诱变副干酪乳杆菌，在提升产酸的同时，保持了活菌数且活菌数有所提升；其中，连续发酵7d后的酸度比副干酪乳杆菌L105的酸度提高了18.1°T；筛选得到的诱变副干酪乳杆菌具有遗传稳定性，对胆盐的耐受能力及产胞外多糖的能力未降低。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法。

背景技术

目前，全球对益生菌食品存在着极大的兴趣，并且正在研究开发含有大量潜在健康益处的益生菌的新型食品。对益生菌来说，最重要的是对人的食用安全，因此，益生菌食品中最广泛使用的是乳酸菌属和双歧杆菌属，它们都自然存在于人的肠道中。在乳酸菌中，干酪乳杆菌是益生菌食品中最常用的一种。因此，开发干酪乳杆菌具有极大的价值及意义。它具有一定的营养价值和保健作用。国内外对优良乳酸菌的选择及发酵剂的研究与开发已受到各国的重视。近几年，对乳酸菌的加工和功能特性的研究较为重视，原因在于发酵乳制品几乎都是通过乳酸菌发酵而来的。在工业生产中更需要性能优良的品种，可以使产品的品质更完美，更利于产品的销售以及使用者对于产品有更好的感受。因此，在发酵产品的过程中乳酸菌的筛选是至关重要的一步。对于乳酸菌的筛选必须具有优良的发酵特性，包括酸的产生和香气的产生，产粘特性；菌株的性能与酸奶的质量直接相关，酸产能力强，感官品质优良等，对酸奶的生产都具有重要意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供了一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法。

本发明一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法的技术方案，具体包括如下步骤：

步骤一，诱变：将副干酪乳杆菌L105冻干菌株置于无菌器皿中，用20W的紫外灯在距离22～28cm处照射20～25s；

步骤二，培养：将诱变后的菌株置于MRS液体培养基中培养，传代3-4代后，获得诱变菌液；

步骤三，筛选：将诱变菌液离心洗涤2次后取菌体沉淀，稀释后涂布于加碳酸钙、4.5％NaCl的MRS平板上培养，然后观察挑出溶钙圈较大的菌落置于MRS液体培养基中培养；

步骤四，分离鉴定：经过分离挑取步骤三的单菌落后，进行培养，经革兰氏染色、基因组DNA的提取、PCR扩增以及测序鉴定进行菌株鉴定，得到鉴定为副干酪乳杆菌的菌株；

步骤五，滴定酸度的筛选：将步骤四鉴定后的副干酪乳杆菌株接种于pH 6.5的MRS液体培养基中，经37℃过夜活化后，按1％接种量分别接种于12％脱脂乳中，将其放入37℃恒温培养箱中，连续发酵7d，测定发酵7d后的滴定酸度；

步骤六，其他性质评价：将筛选得到的诱变副干酪乳杆菌株进行形态学观察、生长曲线的测定、耐酸、耐胆盐、胞外多糖含量以及表面疏水性的测定。

进一步的，所述的副干酪乳杆菌L105为从云南大理的乳扇中进行分离筛选的副干酪乳杆菌L9进行耐酸、耐氧适应性驯化后得到的，该菌株具有良好的发酵性能。

进一步的，所述的MRS液体培养基为10g蛋白胨，20g葡萄糖，10g牛肉膏，5g酵母浸粉，2g磷酸氢二钾，2g柠檬酸二铵，5g无水乙酸钠，0.58g硫酸镁，0.2g硫酸锰，1mL吐温80，1L蒸馏水，调节pH值至6.5。