[发明专利]一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法

权利要求书

1.一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤一，诱变：将副干酪乳杆菌L105冻干菌株置于无菌器皿中，用20W的紫外灯在距离22～28cm处照射20～25s；

步骤二，培养：将诱变后的菌株置于MRS液体培养基中培养，传代3-4代后，获得诱变菌液；

步骤三，筛选：将诱变菌液离心洗涤2次后取菌体沉淀，稀释后涂布于加碳酸钙、4.5％NaCl的MRS平板上培养，然后观察挑出溶钙圈较大的菌落置于MRS液体培养基中培养；

步骤四，分离鉴定：经过分离挑取步骤三的单菌落后，进行培养，经革兰氏染色、基因组DNA的提取、PCR扩增以及测序鉴定进行菌株鉴定，得到鉴定为副干酪乳杆菌的菌株；

步骤五，滴定酸度的筛选：将步骤四鉴定后的副干酪乳杆菌株接种于pH 6.5的MRS液体培养基中，经37℃过夜活化后，按1％接种量分别接种于12％脱脂乳中，将其放入37℃恒温培养箱中，连续发酵7d，测定发酵7d后的滴定酸度；

步骤六，其他性质评价：将筛选得到的诱变副干酪乳杆菌株进行形态学观察、生长曲线的测定、耐酸、耐胆盐、胞外多糖含量以及表面疏水性的测定。

2.根据权利要求1所述的一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法，其特征在于，所述的副干酪乳杆菌L105为从云南大理的乳扇中进行分离筛选的副干酪乳杆菌L9进行耐酸、耐氧适应性驯化后得到的，该菌株具有良好的发酵性能。

3.根据权利要求1所述的一种高产酸副干酪乳杆菌的筛选方法，其特征在于，所述的MRS液体培养基为10g蛋白胨，20g葡萄糖，10g牛肉膏，5g酵母浸粉，2g磷酸氢二钾，2g柠檬酸二铵，5g无水乙酸钠，0.58g硫酸镁，0.2g硫酸锰，1mL吐温80，1L蒸馏水，调节pH值至6.5。