[发明专利]芙蓉菊与匍地菊的属间远缘杂种创制方法

权利要求书

1.芙蓉菊与匍地菊的属间远缘杂种创制方法，其特征在于，以芙蓉菊属芙蓉菊与菊属匍地菊为亲本进行杂交，利用幼胚拯救技术获得远缘杂种；

以二倍体芙蓉菊为母本，四倍体匍地菊为父本进行远缘杂交；

所述方法包括：

1)亲本准备：培养两亲本使花期相遇；

2)远缘杂交：当父母本均开花时，母本去雄，取父本新鲜花粉进行授粉并套袋；

3)胚珠剥取：取杂交授粉后18天的头状花序，取出胚珠；

4)幼胚离体培养：将胚珠接种到不同激素配比的诱导培养基中进行培养，然后转入生根培养基中培养至出苗；

5)杂种F1代的获得：待幼苗根长至1cm以上，移植到基质中进行炼苗，之后上盆常规管理；

6)真杂种的筛选：根据对亲本及杂种F1代的表型观察，并结合染色体鉴定和流式细胞分析，从F1代植株中筛选出真杂种；

所述诱导培养基为含有2.0mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA，pH5.6的MS培养基；

所述生根培养基为：1/2MS+0.1mg/L NAA，pH5.8；

步骤4)中进行诱导培养和生根培养的条件为：温度20-25℃，每日光照14-16h，光照强度1600-2000lx；诱导培养4-6周后转为生根培养；

步骤5)中所述基质由蛭石和珍珠岩按体积比1:1混合而成；

炼苗条件为：温度27-30℃，相对湿度60-70％，培养30-45天。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)包括：从8月份开始对母本芙蓉菊进行8-10小时的短日照养护，使其10月中旬达到盛花期。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)包括：取杂交授粉后的头状花序，对雌性小花进行消毒灭菌，去掉子房壁，取出胚珠。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，消毒灭菌的方法包括：用70％-75％的酒精对雌性小花表面消毒30-45秒，无菌水冲洗后，再用8％-13％的H₂O₂水溶液灭菌10-15分钟，然后无菌水冲洗。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤6)所述染色体鉴定包括：取幼根，用无菌水冲洗3-5次，转入1-2mol/L HCl溶液中，在60-80℃水浴条件下解离10-15min，用无菌水冲洗3-5次，再用蒸馏水漂洗5-8min，截取根尖白色部分，滴加改良的苯酚品红染色液，染色10-15min。

6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤6)所述流式细胞分析包括：以二倍体芙蓉菊作为参照，对杂交后代进行倍性水平检测；所述表型选自株高、冠幅、叶长、叶宽、叶柄长中的至少一种。