[发明专利]一种烟草赤星病人工接种鉴定方法

说明书

本发明公开了一种烟草赤星病人工接种鉴定方法，其特征在于，包括以下方法：S1：赤星病菌培养：将活化的供试菌株打取菌饼，转接到PDA平板上，分别于28℃恒温培养5d、10d、15d，备用；S2：接种体的制备：制备菌丝块接种体、菌丝接种体、孢子液接种体，孢子液浓度分别为105、106、107孢子/mL浓度；涉及烟草赤星病鉴定技术领域。该烟草赤星病人工接种鉴定方法在对叶子进行接种时，按压注射器的推柄时，可以通过手指向上拉动提耳，提耳向上推动滑块，滑块向上移动并带动转动杆推动连接块，连接块推动弧形限位件将注射器表面夹紧，防止在推动推柄时，使注射器相对弧形限位件移动。

技术领域

本发明涉及烟草赤星病鉴定技术领域，具体为一种烟草赤星病人工接种鉴定方法。

背景技术

烟草赤星病是由链格孢菌引起的一种叶部真菌病害，属半知菌亚门。该病发生于烟叶成熟期，从烟株下部叶片开始发生，随着叶片成熟，病斑从下而上逐步发展。斑点大致呈圆形，有坏死的中心和同心圆环，通常被黄色的晕包围，斑点大小从小雀斑症状(约1mm)到大的病灶直径1至3厘米不等。该病具有潜育期短、流行速度快的特点，在适宜的环境条件下，短时间内即可造成大流行，给烟叶生产带来巨大损失。

烟草赤星病已是为害烟草生产的主要真菌病害，因此，科学的控制赤星病是生产上亟待解决的问题。利用抗病品种是防治烟草赤星病最为有效的措施，那么准确、简便、有效的人工接种方法显得尤为关键，因为依靠田间自然发病鉴定，调查困难，费时费力，周期长，而人工接种法可节省菌液、劳力、试材和设备，且环境条件可控、稳定，不受干扰，接种简单、发病快速、结果更为准确可靠。

接种是证病过程的重要环节，是研究赤星病病原致病性、发病规律、侵染途径、品种的抗性鉴定及控制病害等方面的有效保障，特别是在品种对烟草赤星病的抗性研究中，对所鉴定品种进行人工接菌诱发病害发生是品种抗性筛选研究不可缺少的手段和方法。目前，已报道的赤星病菌人工接种方法主要有菌丝块接种法、菌丝悬滴接种法、孢子悬滴法、孢子液棉球法及喷雾法；但在试验中发现，利用上述几种不同方法进行赤星病病菌接种时，对赤星病的发病程度影响差异很大，且出现了接菌不发病或发病不理想的问题，接种方法的不成熟会限制了病原菌与寄主互作研究工作的开展。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种烟草赤星病人工接种鉴定方法，解决了现有几种不同方法进行赤星病病菌接种时，对赤星病的发病程度影响差异很大，且出现了接菌不发病或发病不理想的问题的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种烟草赤星病人工接种鉴定方法，包括以下方法：

S1：赤星病菌培养：将活化的供试菌株打取菌饼，转接到PDA平板上，分别于28℃恒温培养5d、10d、15d，备用；

S2：接种体的制备：制备菌丝块接种体、菌丝接种体、孢子液接种体，孢子液浓度分别为105、106、107孢子/mL浓度；

S3：叶片伤口注射：包括以下步骤：

T1：选取烟株下部叶脚叶，经75％酒精棉球擦拭和无菌水清洗后，置于干净的育苗托盘中，每个叶片取6～10个接种点，针头刺破接种点部位叶片的表皮，即制造伤口准备接种；

T2：用注射器且去掉针头吸取不同供试浓度的分生孢子悬浮液，然后通过手指抵住带有伤口的接种点叶片背面，同时从叶片正面的接种点处缓慢注入叶片叶肉组织内，接种量为10μL，对照叶片接种点注射等量无菌水，每次处理2个叶片，3次重复；

T3：接种后的叶片叶基处用浸泡无菌水的脱脂棉球保湿，托盘覆盖保鲜膜保湿并置于28～30℃的人工气候室中，黑暗培养8h后，以日光灯照明，日照时数为每日12h，3天后观察并跟踪调查接种后发病情况，接种后10d，跟踪记录各处理的发病率，调查病情指数和病斑大小。