[发明专利]鸭丙型肝炎病毒和鸭新型微核糖核酸病毒双重RT-PCR检测引物

说明书

本发明涉及一种鸭丙型肝炎病毒和鸭新型微核糖核酸病毒双重RT‑PCR检测引物，所述引物如下：针对鸭丙型肝炎病毒的特异性引物序列如SEQ.ID.No.1、SEQ.ID.No.2所示，目的片段大小为502bp；针对鸭新型微核糖核酸病毒的特异性引物如SEQ.ID.No.3、SEQ.ID.No.4所示，目的片段大小为255bp。本发明利用所述引物能够建立对DuHCV和DuMV进行鉴别诊断的双重RT‑PCR检测方法，该方法能够同时对鸭群中DuHCV和DuMV感染进行检测，简化操作程序，避免了常规PCR的重复检测，具有低成本、高效率等优点。

技术领域

本发明属于动物病毒学领域，具体涉及一种鸭丙型肝炎病毒和鸭新型微核糖核酸病毒双重RT-PCR检测引物。

背景技术

我国水禽养殖量居世界首位，是养禽业的重要组成部分，然而近年来在我国水禽当中陆续出现多种新发传染病，并不断流行，这些新发传染病的发生已给我国水禽业造成了巨大的经济损失，并已成为严重制约我国水禽产业健康稳定发展的关键因素。

根据国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy ofViruses) 的最新分类，黄病毒科(Flaviviridae Family)下设4个病毒属：黄病毒属(Flavivirus)，有53个病毒种，有些是人畜共患病原体，如流行性乙型脑炎病毒、登革热病毒；丙型肝病毒属(hepacivirus)，有14个病毒种；Pegivirus病毒属，有11个种；瘟病毒属(Pestivirus)，有11个种，常见的如猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是属于黄病毒科、丙型肝炎病毒属的单股正链RNA病毒，其病毒粒子呈球形，直径约40-60nm，核衣壳呈二十四面体对称，核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。鸭丙型肝炎病毒(duck hepacivirus，DuHCV)是从患有产蛋异常现象的鸭群中新发现的一种丙型肝炎病毒，其基因组具有一般丙型肝炎的特征，为单股正链RNA，基因组长为11422bp，编码一个长度为10824bp的开放阅读框(open reading frame， ORF)，编码的多聚蛋白长为3607个氨基酸。

微核糖核酸科(Picornaviridae Family)病毒是重要的人畜共患病原体,它会导致人和动物出现亚临床感染或从轻度发热到心脏、肝脏和中枢神经系统的严重疾病。微核糖核酸科病毒是一类二十面体对称、呈球形，直径约20-30nm、无囊膜的单股正链RNA病毒。微核糖核酸科病毒包含63个病毒属，常见的有口蹄疫病毒属(Aphthovirus)、肠病毒属(Enterovirus)、心病毒属(Cardiovirus)、肝病毒属(Hepatovirus)等。微核糖核酸科病毒基因长度一般为6.6kb-9.8kb，基因组一般仅含有一个大的开放阅读框(open readingframe，ORF)，3’端为Poly A尾，5’端有VPg蛋白与之共价结合，基因组RNA有感染性。近年来，随着病毒宏基因组学研究的不断深入，归属于微核糖核酸科Megrivirus属的病原先后从火鸡、鸡、鸽子和鸭中发现。基因组学分析发现，鸭新型微核糖核酸病毒(duck megrivirus,DuMV)的基因组结构特征和火鸡源Megrivirus、鸡源Megrivirus相似，且其聚蛋白含有典型微核糖核酸科病毒的特征性基序。遗传进化分析表明，鸭新型微核糖核酸病毒(DuMV)与Megrivirus属的火鸡、鸡、鸽子源新型微核糖核酸病毒处于同一遗传进化分支。

但是，当前尚未见可同时对两种新发鸭群病毒——鸭丙型肝炎病毒 (DuHCV)和鸭新型微核糖核酸病毒(DuMV)进行双重RT-PCR检测方法的引物的研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。本发明建立的双重RT-PCR检测方法能够对鸭群中流行的DuHCV和DuMV的进行鉴别诊断，为鸭群中开展新发DuHCV和DuMV流行病学调查及后续科学防控相关疾病奠定基础，具有十分重要的研究意义。

发明内容