[发明专利]一种乳酸菌分离培养基配方及培养法

说明书

本发明属于白酒酿造技术领域，尤其涉及一种乳酸菌分离培养基配方及培养方法。本发明提供的乳酸菌分离培养基含有无水乙醇、D‑乳酸、L‑乳酸、乙酸、血清、营养盐和维生素，不含有柠檬酸二胺。所述的培养基能够分离乳酸菌的效果好，尤其能够分离和培养白酒发酵过程中难以分离的乳酸菌。其中，酱香型白酒发酵过程中酒醅微生物多样性发现，发酵过程中存在一种乳酸菌该菌占发酵过程中乳酸菌总量的50％以上，是酱香型白酒发酵中的主要乳酸菌，然而，现有的培养基均不能将其培养和分离。而本发明的培养基能够分离该乳酸菌，为研究该菌种的功能特性和基因型提供活菌株。

技术领域

本发明属于白酒酿造技术领域，尤其涉及一种乳酸菌分离培养基配方及培养方法。

背景技术

研究发现自然界中尚存在大量未有合适培养方法的微生物。微生物培养困难是由于一些抵制培养的特殊原因，包括温度、pH、氧气、营养等。此外，面对不利的生长环境，为了生存，微生物可能进入了一种“有活性但不分裂的状态”或“休眠的状态”，也就是细胞是活着的但是不再分裂，并且仅当外部的条件变得有利或提供了合适的生长因素和信号，微生物才能够复苏。白酒生产是开放式固态发酵过程，酒醅微生物群落组成十分复杂。经酿造活动的长期驯化，酒醅中的微生物在酒醅高酸、营养物质多样的环境中得以更好地生长和代谢。

乳酸菌是能够发酵糖类物质产生乳酸的一类微生物的总称，普遍存在于白酒发酵过程中，对白酒品质具有重要的影响，深入研究不同类型乳酸菌的产酸代谢机理对酿酒技术研究具有重要意义。

目前常见的乳酸菌分离方法为MRS基础培养基直接分离，固态发酵过程中的乳酸菌经过长期的驯化，更适宜在酒醅环境中生长，因此对于固态发酵酒醅中乳酸菌的分离而言，普通的MRS分离培养基选择性低，缺乏酒醅乳酸菌生长所需的一些微量物质。因此可分离乳酸菌种类及数量较少，且分离效果易受酵母等微生物的干扰。

发明内容

本发明提供了一种培养基，其可以培养16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示的乳酸菌(下称目的乳酸菌)。

16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示的乳酸菌被报道存在于酱香型白酒发酵酒醅中^[1]和镇江白醋醋糟中^[2]，与本发明培养基培养的乳酸菌16S rRNA具有100％同一性。

本发明还提供了一种可以从酒醅中分离培养所述目的乳酸菌的方法。

一些实施方式中，本发明了提供了一种培养基配方，能够分离该乳酸菌，获得活菌株。

一些实施方式中，本发明提供了一种乳酸菌培养基，所述培养基含有无水乙醇、D-乳酸、L-乳酸、乙酸、血清、营养盐和维生素，不含有柠檬酸二胺。

一些实施方式中，所述培养基含有无水乙醇3-5％v/v、D-乳酸0.2-0.4％v/v、L-乳酸 0.2％-0.4％v/v、乙酸0.2％-0.4％v/v、血清2-4％v/v、营养盐0.05-0.15％v/v和维生素0.05- 0.15％v/v。

一些实施方式中，所述培养基含有无水乙醇3.5-4.5％v/v、D-乳酸0.25-0.35％v/v、L-乳酸0.25-0.35％v/v、乙酸0.25-0.35％v/v、血清2.5-3.5％v/v、营养盐0.08-0.1％v/v和维生素 0.08-0.1％v/v。

一些实施方式中，所述培养基含有无水乙醇3.5-4％v/v、D-乳酸0.3-0.32％v/v、L-乳酸 0.3-0.32％v/v、乙酸0.3-0.32％v/v、血清3-3.2％v/v、营养盐0.08-0.1％v/v和维生素0.08- 0.1％v/v。

一些实施方式中，所述培养基还含有KH₂PO₄。

一些实施方式中，所述KH₂PO₄的浓度为0.1～6g/L。