[发明专利]银杏中生长素N糖基转移酶蛋白及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了银杏中生长素N糖基转移酶蛋白及其编码基因与应用。该蛋白如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有生长素N糖基转移酶活性的由a)衍生的蛋白质。本发明银杏中生长素N糖基转移酶的鉴定将极大地推进生长素‑氨基酸‑N‑葡萄糖苷的生物合成，为其成为新药提供充足的原料，同时，这也将为其它药用植物的研究提供思路。生长素‑氨基酸‑N‑葡萄糖苷的生物合成将为其新药创制提供充足的原料保障，并为其它药用植物研究提供借鉴。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别地涉及银杏中生长素N糖基转移酶蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

银杏(Ginkgo biloba L.)属银杏科植物，其果实亦称白果，具有敛肺平喘、止咳祛痰等功效。国内外对银杏叶、果的化学成分进行了广泛的研究，并取得了一定的应用成果。其中生长素-氨基酸-N-葡萄糖苷在白果中富集，动物实验表明它具有非常明显的止咳药效。生长素类-N-葡萄糖苷有待利用现代药学研究将其开发为有效新药，对其生物合成途径的研究将具有重要的研究意义和潜在的巨大经济价值。

生长素类O-糖基转移酶在不同物种已有很多报道，然而N-糖基转移酶的则一直未被发现。生长素类-N-葡萄糖苷的N位加糖反应，化学合成需要多步反应，十分复杂，而生物酶可以直接一步完成，且效果高效。

发明内容

本发明基于白果中的生长素-氨基酸-N-葡萄糖苷的药效价值，化学合成困难，基于代谢谱、转录组、酶活分析和鉴定，挖掘银杏中生长素N糖基转移酶，利用生物酶的方法，一步在生长素或生长素氨基酸类化合物的N位上直接加葡萄糖基，达到高效、环保合成生长素-氨基酸-N-葡萄糖苷的目的。

本发明的技术方案如下：

本发明所提供了一种蛋白，是如下a)或b)的蛋白质：

a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有生长素N糖基转移酶活性的由a)衍生的蛋白质。

所述生长素N糖基转移酶活性是催化生长素或生长素氨基酸类化合物的N糖基化反应，生成生长素-N-葡萄糖苷或生长素-氨基酸-N-葡萄糖苷。

所述生长素为吲哚乙酸；所述生长素氨基酸类化合物为吲哚乙酸和氨基酸形成的酰胺类化合物；所述吲哚乙酸和氨基酸形成的酰胺类化合物为吲哚乙酸-天冬氨酸、吲哚乙酸-甘氨酸、吲哚乙酸-谷氨酸或吲哚乙酸-亮氨酸。

所述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

所述编码基因为如下1)或2)或3)所示：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA分子具有90％以上的同源性的DNA分子。

将该基因命名为GbNGT1，将其编码的蛋白命名为GbNGT1。具体信息如下：GbNGT1基因序列如序列表中序列1所示，其含有1509个核苷酸，其编码序列表中序列2所示的蛋白，序列2由502个氨基酸组成。

含有所述编码基因的表达盒、重组表达载体、转基因细胞系或重组微生物也属于本发明的保护范围。

扩增所述编码基因全长或其任一片段的引物对也属于本发明的保护范围，所述引物对中，一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示。

所述的蛋白在作为生长素N糖基转移酶中的应用也属于本发明的保护范围。