[发明专利]一种冻干的新型冠状病毒、流感病毒、肺炎病毒核酸检测试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及核酸检测技术领域，且公开了一种冻干的新型冠状病毒、流感病毒、肺炎病毒核酸检测试剂盒，包括长方体纸盒包装，所述长方体纸盒包装里面是带三个槽的海绵，所述海绵的三个槽内分别插有装有全组分新型冠状病毒冻干反应体系的西林瓶、装有阳性对照品的塑料离心管和装有阴性对照品的塑料离心管。本发明采用冻干型RT‑PCR核酸检测技术，相较酶联免疫法特异性强、敏感性高，相较胶体金免疫层析法准确度更高，相较常规PCR法耗时短，与现有技术对比，本发明的全组分新型冠状病毒冻干反应体系保护了热敏性生物制品的生物活性，制品冻干后水分含量特别低，使制品稳定性提高，受污染机会减少，利于保存、方便运输，延长质保。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体为一种冻干的新型冠状病毒、流感病毒、肺炎病毒核酸检测试剂盒与检测方法。

背景技术

2019年12月，出现了新型肺炎，主要的传播途径是呼吸道飞沫传播和接触传播，气溶胶和粪口等传播途径，2020年1月12日，新型冠状病毒被世界卫生组织暂命名为“2019-nCoV”，主要引起发热、干咳、乏力为主要表现，截至北京时间2020年6月29日8:50全球累计确诊10174300例；该病暂时无明确治疗方法，在新冠肺炎病人发病早期，核酸检测方法是最有效的检测途径，为临床诊断作出重要参考。

目前市场上新型冠状病毒检测以ELISA(酶联免疫法)、胶体金免疫层析法、常规PCR法、RT-PCR法为主，而这些方式还存在特异性差、敏感性较差、准确度低和耗时较长的问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种冻干的新型冠状病毒、流感病毒、肺炎病毒核酸检测试剂盒与检测方法，解决了现有技术还存在特异性差、敏感性较差、准确度低和耗时较长的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种冻干的新型冠状病毒、流感病毒、肺炎病毒核酸检测试剂盒，包括长方体纸盒包装，所述长方体纸盒包装里面是带三个槽的海绵，所述海绵的三个槽内分别插有装有全组分新型冠状病毒冻干反应体系的西林瓶、装有阳性对照品的塑料离心管和装有阴性对照品的塑料离心管，所述长方体纸盒包装内还含有使用说明书一份。

优选的，所述阴性对照品为RNase-Free ddH2O，所述全组分新型冠状病毒冻干反应体系中含有B2M基因的探针，通过检测内标是否正常来检测样本采集、提取过程，避免假阴性结果。

优选的，所述阳性对照品为含有目的检测基因的RNA假病毒，更加接近病毒结构，有效提高试剂盒制备的安全性，与样品同时参与提取，能更好地检验整个实验过程，保证检测结果的可靠性。

优选的，所述全组分新型冠状病毒冻干反应体系的使用组分及基本原理为：PCR反应液(成分)使用热启动酶Anstart Taq DNA Ploymerase(5U/μL)和超级反转录酶SuperMMLV Reverse Transcriptase(200U/μL)将RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，Super MMl vReverse Transcriptase(200U/μL)有很强的模板兼容性，具有高效的逆转录活性，且无RNaseH活性，在引物的作用下，使脱氧核苷酸加到模板链上，引物链沿模板延伸，添加的TaqDNA聚合酶将脱氧核苷酸加到模板上后，将该脱氧核苷酸与原来的脱氧核苷酸间的磷酸二酯键连在一起，使脱氧核苷酸单链向前延伸，最终形成一个新的双链DNA分子，为消除PCR体系中混入的扩增残留污染物，在dNTP原有工艺中加入UDG酶(Uracil DNAGlycosylase尿嘧啶DNA糖基化酶)，即dN(U)TP Mix，配制比例为ACGTU等量(比例：1:1:1:1:1)，终浓度为20mM，Taq DNA聚合酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其5’—3’端外切核酸酶活性就会把探针切掉，荧光报告基团和淬灭剂分离，即产生荧光号，再根据捕捉信号进行结果判定。