[发明专利]一种可消除HAMA效应的试剂盒

说明书

本发明提供一种可消除HAMA效应的试剂盒，本发明技术方案通过使用抗抗原的人源化抗体以及带有生物催化酶标记的抗人源化抗体的检测抗体，该检测抗体与人源化抗体通用连接，人源化抗体可以消除抗原检测过程中HAMA效应带来的假阳性和假阴性，使用通用检测抗体可以减少人源化抗体的标记，使得该抗原检测试剂盒在针对不同的抗原制备方法更简单，不需要每个人源化抗体都进行标记，只需要使用通用检测抗体进行标记则可以用于所有的抗原检测中。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别涉及一种可消除HAMA效应的试剂盒。

背景技术

双抗体夹心法是检测抗原的常用方法，该方法是在固相载体上包被捕获抗体，先捕获样本中的待测抗原，再结合标记抗体，捕获抗体和标记抗体结合不同抗原决定簇，形成“捕获抗体-抗原-标记抗体”的三明治结构。

嗜异性抗体属于免疫球蛋白，存在人血清或血浆中。其能与其他种属抗体(如鼠源抗体)结合，干扰免疫检测系统。人抗动物抗体(Human anti-animal antibodies，HAAA)是最常见的嗜异性抗体。调查发现，人群中HAAA的发生率约达80％，其诱因包括接触动物、接受单克隆抗体治疗等。此外，人抗鼠抗体(Human anti-mouse antibody，HAMA)是最常见的HAAA。在免疫检测中，HAMA与鼠源抗体结合，干扰免疫分析系统，造成实验结果偏差，称为HAMA效应。

以双抗体夹心法为例。正常情况：样本中的抗原分别与两种抗体结合(捕获抗体和标记抗体)，结合在固相上的标记抗体数量与样本中抗原的浓度成正比(图1a)。假阳性：在无抗原存在情况下，HAMA可以桥连捕获抗体和标记抗体，因而增加标记抗体的结合量，造成假阳性(图1b)。假阴性：在抗原存在情况下，HAMA优先与固相抗体结合，产生空间位阻或固相抗体构象改变，使之不能与抗原结合，造成假阴性(图1c)。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种可消除HAMA效应的试剂盒，旨在消除抗原检测过程中的HAMA效应，减少假阳性和假阴性的情况，提高检测准确率，同时使得检测过程更简便。

为实现上述目的，本发明提出的一种可消除HAMA效应的试剂盒，包括第一抗体、第二抗体和第三抗体，所述第一抗体为特异结合抗原的捕获抗体，所述第二抗体为抗所述抗原的人源化抗体，所述第三抗体为抗所述人源化抗体的检测抗体，所述检测抗体标记有生物催化酶。

可选地，所述人源化抗体包括嵌合抗体、CDR抗体、表面重塑抗体、全人源抗体、单链抗体、双链抗体以及上述抗体的衍生物中的任一种。

可选地，所述人源化抗体的重链恒定区氨基酸为人源序列。

可选地，所述检测抗体与所述人源化抗体的重链恒定区结合。

可选地，所述生物催化酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

可选地，还包括多孔板、包被缓冲液、封闭缓冲液、显色底物和终止液。

本发明提出的另一种可消除HAMA效应的试剂盒，包括：抗HBeAg的捕获抗体，抗HBeAg的人源化单抗，标记有生物催化酶的抗人源化单抗抗体，酶标板，包被缓冲液，封闭缓冲液，显色底物，终止液。

可选地，所述人源化单抗的重链恒定区氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

可选地，所述人源化单抗的重链恒定区氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

可选地，所述显色底物为四甲基联苯胺或PNPP，所述终止液为1M硫酸。