[发明专利]甘蓝型黄籽油菜抗草甘膦隐性核不育临保系的选育方法

权利要求书

1.一种甘蓝型油菜小孢子的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：

(1)从甘蓝型油菜花序上取花蕾在小孢子分离培养基中研磨、过滤、离心后获得小孢子沉淀物a；

(2)所述小孢子沉淀物a在含秋水仙碱的胚状体诱导培养基中培养获得培养物，将培养物离心得小孢子沉淀物b，将小孢子沉淀物b在不含秋水仙碱的胚状体诱导培养基中培养至可见胚状体，转到摇床继续培养至子叶期获得子叶期胚状体；

(3)将所述子叶期胚状体转入胚状体成苗培养基中培养成苗；

步骤(1)中所述花蕾的长度为3.5-4.0mm。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述甘蓝型油菜花序为主花序或一次分枝花序，所述取花蕾的时期为初花期。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述小孢子分离培养基包括：2500mg/L的KNO₃、250mg/L的MgSO₄·7H₂O、150mg/L的CaCl₂·2H₂O、134mg/L的(NH₄)₂SO₄、150mg/L的NaH₂PO₄·H₂O、0.83mg/L的KI、3.0mg/L的H₃BO₃、10mg/L的MnSO₄·4H₂O、2.0mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CoCl₂·6H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O、100mg/L的肌醇、1.0mg/L的烟酸、1.0mg/L的盐酸吡哆醇、10mg/L的盐酸硫铵、13.2mg/L的FeNaEDTA和130g/L的蔗糖。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述胚状体诱导培养基包括：125mg/L的KNO₃、125mg/L的MgSO₄·7H₂O、500mg/L的Ca₄NO₃·4H₂O、125mg/L的KH₂PO₄、26.4mg/L的FeNaEDTA、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CoCI₂·6H₂O、100mg/L的肌醇、5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的盐酸硫胺素、2mg/L的甘氨酸、0.5mg/L的叶酸、0.05mg/L的生物素、30mg/L的谷胱甘肽、800mg/L的L-谷氨酰胺、100mg/L的L-丝氨酸和130000mg/L的蔗糖。

5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述含秋水仙碱的胚状体诱导培养液中秋水仙碱的浓度为10-50mg/L。

6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述小孢子沉淀物a在含秋水仙碱的胚状体诱导培养基中密封，30-32℃暗培养1-2天。