[发明专利]一种信号放大的酶标二抗的制备方法

权利要求书

1.一种信号放大的酶标二抗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，且以下步骤顺次进行：

步骤A1、葡聚糖氧化，在室温下将葡聚糖充分溶解于PBS中，加入NaIO₄，避光震荡；加入乙二醇进行反应，取反应液用碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A2、oDex-HRP合成，将HRP加碳酸盐缓冲液，立即加入所述步骤A1氧化葡聚糖混合，避光震荡；

步骤A3、oDex-HRP-IgG合成，上述聚合物中加入羊抗兔/鼠IgG混合，充分混匀后避光搅拌，往溶液中加入氰基硼氢化钠，室温反应；在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵；离心，弃上清。

2.根据权利要求1所述的信号放大的酶标二抗的制备方法，其特征在于，所述步骤A4、加入半饱和硫酸铵清洗，最后沉淀物溶于PBS中；将上述溶液装入透析袋中，用PBS透析过夜，加入抗体稀释液混匀，进行分装冰冻保存。

3.根据权利要求1所述的信号放大的酶标二抗的制备方法，其特征在于，在所述步骤A1和A2之间增加了HRP氧化，包括以下步骤，且以下步骤顺次进行：

步骤A1、葡聚糖氧化，在室温下将葡聚糖充分溶解于PBS中，加入NaIO₄，避光震荡；加入乙二醇进行反应，取反应液用碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A2'、HRP氧化，将HRP溶解在PH4.4醋酸缓冲液中，加入高碘酸钠溶液，室温下避光搅拌，加入乙二醇，浑匀静置；然后用醋酸缓冲液，4℃透析过夜；

步骤A2、oDex-IgG合成，将一部分氧化葡聚糖加入羊抗鼠/兔IgG，室温震荡反应，往溶液中加入氰基硼氢化钠，室温反应；取反应液用碳酸盐缓冲液透析过夜；加入乙二胺盐酸盐，震荡反应，加入氰基硼氢化钠，震荡反应，取反应液用碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A3、oDex-IgG-oHRP合成，取上述反应液，加入氧化HRP和碳酸盐缓冲液，充分混匀后避光搅拌；往溶液中加入氰基硼氢化钠，室温反应；在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，静置离心，弃上清；加入半饱和硫酸铵清洗，最后沉淀物溶于PBS中；将上述溶液装入透析袋中，用PBS透析过夜，加入抗体稀释液混匀，进行分装冰冻保存。

4.根据权利要求3所述的信号放大的酶标二抗的制备方法，其特征在于，在所述步骤A1和A2'之间增加了葡聚糖氨化，包括以下步骤，且以下步骤顺次进行：

步骤A1、葡聚糖氧化，在室温下将葡聚糖充分溶解于PBS中，加入NaIO₄，避光震荡；加入乙二醇进行反应，取反应液用碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A2”、葡聚糖氨化，所述步骤A1透析好的葡聚糖加入乙二胺盐酸盐，震荡反应后，加入氰基硼氢化钠，再次震荡反应；而后用碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A2'、HRP氧化，将HRP溶解在醋酸缓冲液中，加入高碘酸钠溶液，室温下避光搅拌一段时间，加入乙二醇，浑匀静置；然后用醋酸缓冲液，透析过夜；

步骤A2、aDex-oHRP合成，将所述步骤A2'得到的氧化HRP加碳酸盐缓冲液，然后立即加入氨化葡聚糖混合，室温避光震荡一段时间；再加入氰基硼氢化钠还原，震荡反应；碳酸盐缓冲液透析过夜；

步骤A3、aDex-oHRP-IgG合成，取所述步骤A2”得到的氨化葡聚糖和步骤A2得到的HRP的结合物的一半，加入羊抗兔/鼠IgG混合，充分混匀后避光搅拌，往溶液中加入氰基硼氢化钠，室温反应；在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，离心，弃上清；加入半饱和硫酸铵清洗，最后沉淀物溶于PBS中。

5.根据权利要求4所述的信号放大的酶标二抗的制备方法，其特征在于，所述步骤A5、aDex-oHRP-IgG合成，取上述二分之一的结合物，加入戊二醛，室温静止过夜，逐步滴加羊抗鼠/兔IgG，室温反应；将上述溶液装入透析袋中，用PBS透析过夜，加入抗体稀释液混匀，进行分装冰冻保存。