[发明专利]环己烯甲酸酯水解酶及其突变体、编码基因、表达载体、重组菌与应用

权利要求书

1.一种环己烯甲酸酯水解酶，其特征在于，所述的环己烯甲酸酯水解酶为：

氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质。

2.一种环己烯甲酸酯水解酶，其特征在于，所述的环己烯甲酸酯水解酶是将SEQ IDNo.2所示氨基酸序列的第202位丙氨酸残基替换为赖氨酸残基，同时第326位甘氨酸残基替换为丙氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质。

3.一种环己烯甲酸酯水解酶，其特征在于，所述的环己烯甲酸酯水解酶是将SEQ IDNo.2所示氨基酸序列的第78位苯丙氨酸残基替换为缬氨酸残基，同时第202位的丙氨酸残基替换为赖氨酸残基，同时第326位甘氨酸残基替换为丙氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质。

4.一种权利要求1-3任一项所述的环己烯甲酸酯水解酶的编码基因。

5.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求4所述的编码基因。

6.一种表达权利要求1-3任一项所述的环己烯甲酸酯水解酶的重组菌。

7.一种权利要求1-3任一项所述的环己烯甲酸酯水解酶在催化3-环己烯-1-甲酸酯制备光学活性(S)-3-环己烯-1-甲酸中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的应用是采用环己烯甲酸酯水解酶在缓冲液中催化3-环己烯-1-甲酸酯对映选择性水解制备(S)-3-环己烯-1-甲酯，然后在碱性条件下加热水解得到(S)-3-环己烯-1-甲酸。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的缓冲液为柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或甘氨酸-NaOH缓冲液，所述缓冲液的pH为5.0~10.0。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的碱性条件为0.5~1.5 M氢氧化钠溶液。