[发明专利]一种定量检测PD-L1与PD-1结合物含量的试剂盒

说明书

本发明公开了一种定量检测PD‑L1与PD‑1结合物含量的试剂盒，包括磁微粒试剂、酶标二抗试剂、化学发光底物；所述磁微粒试剂包括链亲和素‑磁性微粒与生物素标记的PD L1抗体的结合物，标记为M‑SA/Bio‑Anti‑PD L1；所述酶标二抗试剂包括碱性磷酸酶与PD 1抗体偶联结合物，标记为AP‑Anti‑PD 1；所述化学发光底物包括：3‑(2‑螺旋金刚烷)‑4‑甲氧基‑4‑(3‑磷氧酰)‑苯基‑1,2‑二氧环乙烷二钠盐。采用本发明提供的试剂盒进行检测，完成所有流程出结果时间为20min，相比免疫共沉淀，免疫共定位缩短了反应时间；且具有较高的灵敏度、重复性和稳定性。

技术领域

本发明涉及检验技术领域，具体涉及一种定量检测PD-L1与PD-1结合物含量的试剂盒。

背景技术

目前肿瘤免疫疗法的主要两大领域分别是：细胞治疗、以及以PD-1/PD-L1、 CTLA-4/CD80，CD47/SIRPα为代表的免疫检查点抑制剂。程序性死亡受体(Programmed CellDeath-1，PD-1)主要表达在活化的T/B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、树突状细胞以及间充质干细胞膜以及胞质内，以T细胞为例，PD-1可与其配体PD-L1(高表达在肿瘤细胞中) 结合从而抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌，负性调控免疫应答，使肿瘤细胞发生免疫逃逸现象。免疫检查点抑制剂通过阻断PD-1/PD-L1信号通路，可重新激活T细胞，增强免疫应答反应，从而抑制肿瘤细胞的增殖等。

免疫检查点阻断剂的联用被广泛推荐，这也说明了PD-1/PD-L1在肿瘤治疗中的重要性，目前科研实验都在小鼠上注射PD-1抗体或者PD-L1抗体，然后通过检测PD-1和PD-L1结合物的含量来判定疗效，由于现有检测结合物的方法例如免疫共沉淀、免疫共定位、蛋白质谱等方法均不能准确定量，因此急需一种能检测小鼠PD-1与PD-L1结合物含量的定量检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：，本发明提供了解决上述问题的一种定量检测PD-L1与 PD-1结合物含量的试剂盒，基于磁微粒化学发光检测原理来实现PD-L1与PD-1结合物的定量检测。

本发明通过下述技术方案实现：

一种定量检测PD-L1与PD-1结合物含量的试剂盒，包括磁微粒试剂、酶标二抗试剂、化学发光底物；所述磁微粒试剂包括链亲和素-磁性微粒与生物素标记的PD L1抗体的结合物，标记为M-SA/Bio-Anti-PD L1；所述酶标二抗试剂包括碱性磷酸酶与PD 1抗体偶联结合物，标记为AP-Anti-PD 1；所述化学发光底物包括：3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)- 苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐。

传统的双抗夹心法只检测样本中的一种物质，例如检测样本中的PD-L1，图1磁微粒上标记的是PD-L1抗体1以及碱性磷酸酶上标记的是PD-L1的抗体2，PD-L1的抗体1和抗体2均属于同一种但是有着不同结构域的抗体。本发明提供的试剂盒的，如图2所示，可以同时检测样本里的两种不同物质，并且可以定量这两种结合物的含量。与传统的双抗夹心法有很大的区别。

进一步优选，所述磁性微粒的直径为500nm～2500nm，具有超顺磁性。

进一步优选，所述磁微粒试剂中结合物的M-SA/Bio-Anti-PD L1的浓度为 0.05μg/mL-5μg/mL。