[发明专利]核酸内切酶SpCas9的高PAM兼容性截短型变异体txCas9及其应用

权利要求书

1.一种CRISPR-Cas9核酸酶SpCas9的高PAM兼容性截短型变异体txCas9核酸酶，其特征在于，是将xCas9核酸酶的氨基酸序列截掉120个即第180位到299位的氨基酸后重组所得，记为txCas9核酸酶；编码txCas9核酸酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示。

2.一种表达载体，其含有如SEQ ID NO.5所示的多核苷酸。

3.一种宿主细胞，包含如权利要求2所述的表达载体。

4.一种如权利要求1所述的CRISPR-Cas9核酸酶SpCas9的高PAM兼容性截短型变异体txCas9核酸酶的制备方法，具体步骤包括：首先，构建含有如SEQ ID NO.5所示的多核苷酸的表达载体；然后，将所述表达载体转化得到如权利要求3所述的宿主细胞，筛选并挑出单克隆；最后，将所述单克隆诱导表达，并通过亲和层析或离子交换方法从表达产物中分离出所述的txCas9核酸酶。

5.一种如权利要求1所述的txCas9核酸酶、如权利要求2所述的表达载体作为编辑基因组DNA编辑工具的应用，用于基因组DNA片段的编辑，所述应用为非治疗目的。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的编辑是单点编辑，或者是编辑位点大于等于两个的多点编辑；所述编辑的手段包括删除、突变、插入、倒位、移位、重复或易位。

7.根据权利要求6所述的应用，其特性在于，所述的编辑工具，还包括与靶标DNA片段匹配的引导sgRNA；所述的txCas9核酸酶与能够介导它的sgRNA组合，对目的基因进行编辑。

8.根据权利要求7所述的应用，其特性在于，所述的表达载体和与之匹配的引导sgRNA一同转入宿主细胞，对基因进行编辑。

9.根据权利要求7所述的应用，其特性在于，所述单点或多点编辑，是利用txCas9核酸酶对双链DNA进行剪切，并通过宿主细胞的修复系统对断裂的缺口进行修复。