[发明专利]一种芽孢杆菌、利用该芽孢杆菌进行抗生素残留检测的方法及其应用

权利要求书

1.一株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌已于2019年6月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.18051。

2.一种利用权利要求1所述的地衣 芽孢杆菌进行抗生素残留检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将待测样品于80 ℃灭菌10 min后，冷却到40 ℃以下，备用；

取冷却后的待测样品与含权利要求1所述地衣芽孢杆菌的菌液混合得到反应体系，恒温培养；同时以不含抗生素的样品做阴性对照；

培养一定时间后，加入4% TTC指示剂；其中，待测样品与菌液及指示剂三者的体积比为4.5：0.5：0.15；

继续培养，以阴性对照变色时间为参照，对待测样品进行观察：若变为红色，则说明待测样品中不含青霉素钾、庆大霉素、卡那霉素及链霉素或其含量低于检出限，结果为阴性；若无色，则说明待测样品中青霉素钾、庆大霉素、卡那霉素及链霉素含量高于或等于检出限，结果为阳性；

4种抗生素的最低检出限分别为青霉素钾0.004 IU、庆大霉素0.4 IU、卡那霉素5 IU、链霉素0.5 IU；

其中，反应体系中地衣 芽孢杆菌湿菌体量为0.05 mg/mL时：培养温度为37℃，反应体系培养时间为0.5h；

或，反应体系中地衣 芽孢杆菌湿菌体量为0.1 mg/mL时：温度为37℃，反应体系培养时间为0.5h；或，反应体系中地衣 芽孢杆菌湿菌体量为0.15 mg/mL时：温度为37℃，反应体系培养时间为0.5h。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：加入指示剂培养30min后，每10min观察一次，并以阴性对照变色为参照。

4.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌在抗生素检测中的应用；所述抗生素选自链霉素、青霉素钾、土霉素、阿莫西林、多西环素、卡那霉素、庆大霉素及替米考星中的至少一种。

5.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌在代替嗜热链球菌参照GB/T 4789.27-2008进行抗生素检测中的应用；包括以下步骤：将待测样品于80℃灭菌10 min后，冷却到40℃以下，备用；

取冷却后的待测样品与含权利要求1所述地衣 芽孢杆菌的菌液混合得到反应体系，反应体系中菌量为0.1 mg/mL，37℃恒温培养；同时以不含抗生素的样品做阴性对照；

培养0.5h后，加入4% TTC指示剂；其中，待测样品与菌液及指示剂三者的体积比为4.5：0.5：0.15；

继续培养30min后观察结果，如阴性对照没有变色，则继续培养，每10min观察一次结果，至阴性对照变红；

以阴性对照变色时间为参照，对待测样品进行观察：若变为红色，则说明待测样品中不含青霉素钾、庆大霉素、卡那霉素及链霉素或其含量低于检出限，结果为阴性；若无色，则说明待测样品中青霉素钾、庆大霉素、卡那霉素及链霉素含量高于或等于检出限，结果为阳性；

4种抗生素的最低检出限分别为青霉素钾0.004 IU/mL、庆大霉素0.4 IU/mL、卡那霉素5 IU/mL、链霉素0.5 IU/mL。

6.如权利要求2或3所述的检测方法在抗生素检测中的应用；所述抗生素选自链霉素、青霉素钾、土霉素、阿莫西林、多西环素、卡那霉素、庆大霉素及替米考星中的至少一种。