[发明专利]一种用于检测水牛奶中掺入牛奶的特征肽组合及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测水牛奶中掺入牛奶的特征肽组合及方法。所述特征肽包括水牛和奶牛的特征肽，其中水牛奶的特征肽氨基酸序列为HQGLPQGVLNENLLR和LAEEQLHSMK，牛奶的特征肽氨基酸序列为QVLSNTVPAK。使用本发明特征肽组合通过高效液相色谱‑质谱联用技术能够定性水牛奶粉中的牛奶粉掺假，具有较好的灵敏度，并且本发明选择蛋白中的特征肽段作为检测物质，适用于变性蛋白的检测，因此可以满足同时检测样品中的变性蛋白与非变性蛋白，保证了方法的准确性。

技术领域

本发明涉及一种用于检测水牛奶中掺入牛奶的特征肽组合及方法，属于食品质量安全检测领域。

背景技术

水牛奶营养丰富，其干物质、乳脂肪、乳蛋白、矿物质、维生素等主要营养成分均高于牛奶，且生物活性肽、共轭亚油酸、神经苷节脂、低聚戊糖等含量丰富，是人类优良食物的来源。因此水牛奶也逐渐受到消费者的青睐。然而水牛奶的产量较低且受到季节性变化的影响，导致水牛奶原料成本较高。因此受到经济利益驱使，价格较低、产量较高的牛奶粉掺入水牛奶粉的掺假现象出现。这种掺假行为不仅损害消费者的合法权益，掺入的牛奶更会对牛奶过敏消费者的健康造成威胁。

现阶段定性鉴别水牛奶和牛奶的方法主要有基于DNA检测的PCR法和基于高效液相色谱的指纹图谱法。

申请号为201810540219.9的中国发明专利公开了一种检测畜类源性成分的三重荧光PCR引物组、试剂盒及检测方法，其主要是通过提取样品中DNA,然后利用专利中给出的引物、探针组合物或试剂盒对DNA进行PCR扩增,收集荧光信号,可以实现对绵羊、山羊、羚羊和家牛、水牛、牦牛的6种畜类的准确检测。此方法操作简单，具有较好的特异性，标准误差小，检测时间短等优点。但PCR方法也存在明显的缺陷，由于PCR法基于指数扩增的检测机理，其检测误差较大，同时奶中的DNA主要来自白细胞与脱落的乳腺细胞，这与动物的品种，饲养，健康条件以及生理期有关，所以奶中的DNA含量不稳定，不好建立标准化的检测方法。

申请号为201910482656.4的中国发明专利公开了一种鉴定水牛乳中掺假的检测方法，此方法通过去除水牛乳中的脂肪，然后将样品通过高效液相色谱进行检测得到指纹图谱，可以区分水牛乳中是否掺有奶牛乳。此方法具有良好的重现性和专属性，能够得到样品间具有代表性的指纹图谱可以快速分析是否掺假。但对于基于高效液相色谱的指纹图谱技术来说，实验室条件、仪器设备的不同对检测的标准化和规范化带来一定的阻碍。

液相色谱-质谱联用技术法已经成为物种鉴定的主要方法之一。此种鉴定方法灵敏度高，特异性好。该方法通过比对选择特异性多肽作为生物标记物，对不同物种来源的食物进行溯源调查。许多文献报道了利用该方法进行肉类，乳制品和阿胶等进行了定性鉴定，但未见关于水牛奶的蛋白层次定性鉴定方面的研究。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于检测水牛奶中掺入牛奶的特征肽组合。使用该特征肽组合可以准确检测水牛奶中牛奶的掺假，具有较高的特异性、灵敏度。

一种用于检测水牛奶中掺入牛奶的特征肽组合及，包括水牛奶特征肽和牛奶特征肽，其中水牛奶的特征肽氨基酸序列为LDSESAPLR和TPEDNLEIILR，牛奶的特征肽氨基酸序列为QVLSNTVPAK。

本发明是通过以下的技术方案实现的：

（1）对采集得到的水牛奶和牛奶进行冷冻干燥，所得到的冻干奶粉进行复溶；

（2）对复溶所得到的纯乳品进行测定蛋白浓度测定；

（3）取一定量的蛋白进行蛋白变性处理，使用胰蛋白酶酶解；

（4）酶解所得到的肽段用高效液相色谱-质谱联用技术进行检测。

优选的，所述的复溶按照奶粉与蒸馏水的比例为1:20（w/v）涡旋混匀，在40℃水浴中震荡30 min。