[发明专利]重组人源Ⅲ型胶原蛋白在制备浅表性创伤修护材料中的应用

说明书

本发明公开了一种重组人源III型胶原蛋白在制备浅表性创伤修护材料中的应用。所述的重组人源Ⅲ型胶原蛋白含有498个氨基酸，理论分子量约54.5kd，构建的重组人源Ⅲ型胶原蛋白表达菌株能够有效稳定和大量地表达重组人源Ⅲ型胶原蛋白。本发明的重组人源胶原蛋白具有良好的亲水性及稳定性，其结构与天然胶原蛋白基因序列相应部分100％相同，应用于人体当中不会造成免疫排斥。重组人III型胶原蛋白作为浅表性创伤修护材料使用时，结痂时间提前1～2天，伤口愈合时间明显缩短，伤处平整滑腻，提高了伤口愈合质量，且无明显疤痕，适用于护肤品、医疗器械等领域。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种重组人源III型胶原蛋白在制备浅表性创伤修护材料中的应用。

背景技术

胶原(Collagen)作为细胞外基质中含量最丰富的蛋白，结缔组织和几乎所有薄壁器官间隙组织中最主要的结构蛋白，起着稳定组织和器官并维持其结构完整的作用，在生物医用材料、护肤品等领域应用广泛。目前使用的胶原蛋白主要为天然胶原蛋白，其不易溶于水，且来源于牛、猪、鱼等动物，分子量大小不等，性质复杂，进一步加工困难，同时存在动物病毒隐患，限制了其进一步应用。近几年通过基因构建技术，利用生物反应器表达重组胶原蛋白来解决这些问题，已经取得良好进展。

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种外源蛋白表达系统，既具有原核表达系统操作简易、易于培养、生长速度快、表达量高、成本低等优点，还具有原核生物表达系统不具有的对外源蛋白的修饰如糖基化、蛋白磷酸化等特点。在过去的20年中已有200多种不同蛋白在毕赤酵母中实现了成功表达，其中许多产品已被广泛应用于临床的诊断治疗和科研工作中。在毕赤酵母表达系统中外源基因不是存在于自主复制的表达载体中，而是和表达载体一起通过同源重组整合在酵母染色体上，随染色体一起复制和遗传，不会发生外源基因的丢失现象；毕赤酵母具有强烈的好氧生长偏爱性，可实现细胞高密度培养，利于大规模工业化生产；毕赤酵母可高水平分泌表达外源蛋白，发酵产物的累积不会对其产生毒副作用，并且毕赤酵母自身分泌到培养基中的蛋白很少，便于纯化。

浅表性创伤，例如疤痕，其本质是一种不具备正常皮肤组织结构及生理功能的，失去正常组织活力的、异常的、不健全的组织。疤痕不仅破坏了体表美，还可能妨碍相关组织或器官的生理功能，甚至导致畸形。现在市面上已有一些修复表面创伤的祛疤胶原蛋白材料，但是在速效及显效方面效果不佳。

发明内容

本发明提供一种重组人源III型胶原蛋白在制备浅表性创伤修护材料中的应用。本发明将重组人源胶原蛋白应用于浅表性创伤修护，克服了动物胶原蛋白的缺陷，具有无病毒隐患、无免疫原性和良好的水溶性以及生物相容性的优点。

本发明所述的重组人源III型胶原蛋白在制备浅表性创伤修护材料中的应用，所述的浅表性创伤修护材料可以是修护浅表性创伤的组合物，如与抑菌材料等复配制成修护浅表性创伤的药物组合物；或修护浅表性创伤的敷料等。

本发明所述的浅表性创伤包括疤痕等。

优选地，所述的浅表性创伤修护材料中，重组人源III型胶原蛋白的浓度为0.1％～0.5％(w/v，g/mL)，更优选为0.3％w/v。

本发明所述的重组人源III型胶原蛋白，氨基酸序列如SEQ No.2所示。

本发明所述的重组人源III型胶原蛋白的编码基因Ⅲα498aa，核苷酸序列如SEQNo.3所示。

本发明构建的重组人源III型胶原蛋白质粒ppic9K-Ⅲα498aa的核苷酸序列如SEQNo.4所示，通过将重组人源III型胶原蛋白的编码基因Ⅲα498aa双酶切连接至ppic9K载体的EcoR I和Not I间构建而成。