[发明专利]一种加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法

权利要求书

1.一种加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的序列，其特征在于：包括，

Target，序列信息如SEQ ID NO:1；

Ppp2ca-RNAi-a，序列信息如SEQ ID NO:2；

Ppp2ca-RNAi-b，序列信息如SEQ ID NO:3；

PSC-1，序列信息如SEQ ID NO:4；

Ppp2ca(53604-1)-P1，序列信息如SEQ ID NO:5；

Ppp2ca(53604-1)-P2，序列信息如SEQ ID NO:6；

CMV-F，序列信息如SEQ ID NO:7；

pEGFP-N-3，序列信息如SEQ ID NO:8；

序列信息如SEQ ID NO:9。

2.一种加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：包括，

构建RNAi腺相关病毒载体；

用病毒包装的辅助质粒和所述目的基因的RNAi腺相关病毒载体(高质量重组载体)共转染AAV-293细胞，得到RNAi有效载体腺相关病毒；

将所述病毒注入C57BL/6小鼠体内即可。

3.如权利要求2所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：还包括，构建目的基因过表达载体，用所述目的基因过表达载体和所述目的基因的RNAi腺相关病毒载体共转染293T细胞后，通过观察细胞荧光保证转染效率大于等于70％，再收集细胞提取蛋白，检测目的基因敲减情况。

4.如权利要求2或3所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：所述构建RNAi腺相关病毒载体包括Ppp2ca-RNAi-a、Ppp2ca-RNAi-b的一种或几种。

5.如权利要求4所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：所述构建RNAi腺相关病毒载体，其为使用Target序列和U6-MCS-CAG-EGFP载体进行构建。

6.如权利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：所述构建目的基因过表达载体，其目的基因为Ppp2ca，载体名称为GV143，酶切位点为XhoI/KpnI。

7.如权利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：所述RNAi有效载体腺相关病毒为rAAV9-Ppp2ca-RNAi，病毒滴度可达3.56E+12vg/ml。

8.如权利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：所述将所述病毒注入C57BL/6小鼠体内即可其为注射在脑室。

9.如权利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠脑内朊样传播的方法，其特征在于：在注射所述病毒8个月后的C57BL/6小鼠，均可以检测出小鼠大脑有GFP的绿色荧光，提示了rAAV9病毒载体携带的基因在脑组织可以长期、稳定的表达。