[发明专利]一种三维肿瘤模型脱细胞衍生基质支架的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种三维肿瘤模型脱细胞基质支架的构建方法，其特征在于，所述构建方法以猪源性肾脏组织为主要材料，待脱除细胞后，采用冷冻干燥方法得到的多孔支架具有肾独特的三维多孔结构，且肾小球结构保留完整；包括以下步骤：

(1)从市场取来新鲜的猪肾，将其用清水洗净至水无明显血色，将洗净的猪肾放入－20～－30℃的冰箱冷冻10～14h；

(2)待其冷冻成型后，切除猪的肾盂及肾纤维囊部位，将剩下的肾脏切成多个肾块；

(3)室温下，将步骤(2)的肾块放入pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中浸泡清洗，每隔半小时换一次液，持续多次，去除猪肾小块中的血丝以及去除腥味；

(4)室温下，将步骤(3)处理过的肾小块放入质量分数为0.5～1％的十二烷基磺酸钠水溶液中，在低速磁力搅拌的条件下，搅拌时间为48～72h；

(5)室温下，将步骤(4)中脱细胞后的基质放入pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中浸泡清洗6～10次，每隔20min换次液；

(6)将步骤(5)中的基质放入－20～－30℃的冰箱中冷冻3～5h；将冷冻后的猪肾脱细胞基质冷冻干燥，得到多孔脱细胞基质支架；

(7)将步骤(6)得到的脱细胞基质支架置于交联剂中，并在摇床中常温交联36～48h；

(8)交联后的脱细胞基质支架采用pH为7.4的PBS缓冲液清洗5～6次，每隔30min换液；最后，将清洗后的猪肾脱细胞支架冷冻干燥8～12h，制备猪肾源脱细胞衍生基质支架。

2.根据权利要求1所述的一种三维肿瘤模型脱细胞基质支架的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中清洗过程采用低速搅拌，搅拌速率为5～15rpm。

3.根据权利要求1所述的一种三维肿瘤模型脱细胞基质支架的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)中搅拌速率为5～15rpm。

4.根据权利要求1所述的一种三维肿瘤模型脱细胞基质支架的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)的冷冻干燥的冷阱温度为－45～－55℃，冷冻干燥时间为14～19h。

5.根据权利要求1所述的一种三维肿瘤模型脱细胞基质支架的构建方法，其特征在于，所述步骤(7)中交联剂为以下成分组成的混合溶液，各成分为：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，N-羟基琥珀酰亚胺NHS、乙磺酸MES、乙醇溶液，其中MES作为缓冲液；所述混合溶液中EDC浓度为50mmol/L、NHS浓度为50mmol/L、MES浓度为50mmol/L、乙醇溶液的体积分数为50～55％。

6.采用权利要求1-5任一所述的制备方法得到的三维肿瘤模型脱细胞基质支架应用于三维肿瘤模型的构建，接种癌细胞后，细胞在支架的生长状况良好，且观察到细胞在各层均有不同程度的渗透，在支架中呈立体分布。