[发明专利]一种测定植物油中角鲨烯和β-谷甾醇含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定植物油中角鲨烯和β‑谷甾醇含量的方法，包括步骤：S1、植物油皂化处理：取混匀后的植物油样品，置于具塞玻璃试管中，加入内标和氢氧化钾‑甲醇溶液，再放入恒温水浴锅中进行皂化；S2、SPE小柱净化：皂化好后的样品溶液，加入80％的甲醇溶液稀释，过固相萃取小柱，用80％甲醇淋洗杂质，最后用乙酸乙酯洗脱目标化合物，收集全部洗脱液，浓缩定容过膜后即为待测样。本发明检测步骤简单，溶剂消耗少，适用于角鲨烯和β‑谷甾醇含量的批量检测。

技术领域

本发明涉及一种样品处理方法，尤其涉及一种测定植物油中角鲨烯和β-谷甾醇含量的方法。

背景技术

食用植物油是人体能量和脂肪酸摄入的重要来源，除此之外，植物油中还含有角鲨烯、植物甾醇、维生素E等多种微量成分，这些脂肪伴随物也是人们日常膳食中的重要组成部分。早些年的油脂营养研究多着眼于油脂中脂肪酸组成，片面强调脂肪酸的作用，对油脂中微量脂肪伴随物的重要性认识存在不足。近年来随着生活水平的提高，消费者逐渐开始关注植物油中这些有益微量成分的摄入，以达到健康饮食、膳食平衡的作用。

角鲨烯是一种高不饱的天然萜类化合物，属于脂质不皂化物，具有提高体内超氧化物歧化酶活性、增强机体免疫能力，抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理机能。植物甾醇是一类以环戊烷多氢菲为骨架的天然醇类化合物，具有降低胆固醇、抗癌、防治心血管疾病等功能，被誉为“生命的钥匙”。植物油中最主要的植物甾醇主要是菜籽甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和β-谷甾醇等。

植物油中角鲨烯和植物甾醇均属于脂质不皂化成分，目前文献报道植物油中角鲨烯或植物甾醇的测定方法主要有气相色谱法、气相色谱质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等，而且这些已报道的文献中绝大部分还是采用经典的皂化-液液萃取作为前处理方法。而传统的液液萃取法存在操作步骤繁琐，耗时长，易燃易爆有毒试剂消耗多，而且容易乳化导致方法的重现性差。

发明内容

本发明意在提供一种测定植物油中角鲨烯和β-谷甾醇含量的方法，以解决现有测定植物油中角鲨烯和β-谷甾醇时，操作步骤繁琐，耗时长，易燃易爆有毒试剂消耗多，而且容易乳化导致方法的重现性差的问题。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种测定植物油中角鲨烯和β-谷甾醇含量的方法，其特征在于，包括步骤：

S1、植物油皂化处理：取混匀后的植物油样品，置于具塞玻璃试管中，加入内标和氢氧化钾-甲醇溶液，再放入恒温水浴锅中进行皂化；

S2、SPE小柱净化：皂化好后的样品溶液，加入80％的甲醇溶液稀释，过固相萃取小柱，用80％甲醇淋洗杂质，最后用乙酸乙酯洗脱目标化合物，收集全部洗脱液，浓缩定容过膜后即为待测样。

优选地，所述步骤S2具体为：

S21、活化：用移液器移取5mL甲醇溶液和5mL80％甲醇溶液，取SPE小柱，依次使用5mL甲醇溶液和5mL80％甲醇溶液淋洗小柱；

S22、上样：将所述步骤S1中皂化好的样品溶液，上样到SPE小柱上；

S23、淋洗：用5mL80％甲醇淋洗小柱，淋洗两次，并使用真空泵将液体完全抽干；

S24、洗脱：用离心管置于SPE小柱下方，加乙酸乙酯洗脱样品，自然滴干，得到样品洗脱液；

S25、浓缩：放入氮吹仪中，将样品洗脱液吹到接近干燥时停止；

S26、定容：用乙酸乙酯定容至1mL；

S27、过滤：将定容后的样品溶液过滤膜，制得待测样。

优选地，所述步骤S1中加入内标具体为：分别加入角鲨烷和5α-Cholestan-3β-ol作为内标，浓度均为1mg/mL。