[发明专利]一种体外培育牛黄及其制备方法

说明书

本发明公开了一种体外培育牛黄及其制备方法。以新鲜的牛胆汁为原料，利用现代分离技术获得高纯度的结合胆汁酸（牛磺胆酸、甘氨胆酸、牛磺去氧胆酸，甘氨去氧胆酸）。通过对工业化的体外培育牛黄工艺进行技术提升，在培育环节加入高纯度的结合胆汁酸，最终制得的体外培育牛黄成品不仅符合质量标准，而且结合胆汁酸总含量在4%以上，质量稳定，与优质天然牛黄基本一致。

技术领域

本发明属于体外培育牛黄技术领域，具体涉及利用现代分离技术方法获得结合胆汁酸并用于生产体外培育牛黄的工艺方法及由此方法获得的体外培育牛黄。

背景技术

牛黄即牛胆结石，胆汁酸是其多种有效成分中的一类，胆汁酸分为结合胆汁酸和游离胆汁酸，其中结合胆汁酸如牛磺胆酸、甘氨胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨去氧胆酸有抗菌、消炎等药理作用，其含量高低是区别优质或劣质牛黄的重要指标之一。

天然牛黄是自然形成的产物，质量难免存在差异，其结合胆汁酸的含量也有较大的差异，优质的天然牛黄总结合胆汁酸含量大多在3～7％，如优质的澳洲牛黄(结合胆汁酸含量见表1)。但优质牛黄来源有限，且价格昂贵。

表1：优质澳洲牛黄主要结合胆汁酸含量统计表

现有的体外培育牛黄生产工艺是以牛胆汁为原料，经过细菌发酵后，加入一定量的氢氧化钙、胆红素、胆酸等物质，根据天然牛黄形成机制，运用生物化学、物理化学、流体力学等技术手段，在模拟胆囊内进行培育，通过工业化设备生产而成。现有技术生产的体外培育牛黄，其质量指标与优质天然牛黄相近，其安全性和有效性经过了国家有关部门的认可，2004年国家药品监督管理部门下发文件，同意体外培育牛黄可以等同替代天然牛黄(国食药监注[2004]21号)，缓解了天然牛黄资源紧缺的局面，保障了一些传统名方名药的生产，是中医药传承与创新的典范。然而，一方面，由于牛胆汁来源的不同，牛胆汁中的结合胆汁酸含量有较大差异，能够满足体外培育牛黄工艺要求的牛胆汁有限，牛胆汁资源不能得到充分利用。另一方面，要使成品的差异控制在合理范围内，导致工业化生产过程的控制环节较多，控制流程比较繁琐。随着体外培育牛黄应用范围不断扩展，市场需求日益增长，需要一种新方法，能够更充分的利用不同来源牛胆汁中的结合胆汁酸，并应用到体外培育牛黄的工业化生产中，使生产控制过程更为优化，产品的批次间差异更小。

发明内容

本发明目的是提供一种体外培育牛黄的新方法，从牛胆汁中提取高纯度的结合胆汁酸，并对原有体外培育牛黄的生产工艺进行技术提升，在培育环节加入高纯度的结合胆汁酸和助悬剂，使得最终成品总结合胆汁酸含量在4％以上，含量稳定，与优质天然牛黄基本一致，是优质天然牛黄的理想代用品。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，提供一种体外培育牛黄的方法，包含以下步骤：

1)结合胆汁酸的制备：所述结合胆汁酸为牛磺胆酸、甘氨胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨去氧胆酸；以牛胆汁为原料进行以下处理：

①黏多糖的去除：每升牛胆汁中加入100ml 0.02％的CTAB溶液，搅拌5min，静置30min，过滤去除沉淀，得滤液；

②蛋白质的去除：用氢氧化钠将步骤①的滤液pH调至10～10.5，向每升滤液中加入适量的0.02％的硫酸锌或氯化锌溶液，适量的0.01％的氯化钙或硝酸钙溶液形成金属盐类复合物，过滤去除沉淀，得滤液；

③结合胆汁酸混合物的获取：用浓盐酸将步骤②中滤液pH调至1～2，搅拌2min，静置20min，离心收集沉淀物；