[发明专利]一种体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物

权利要求书

1.一种体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，包括以下步骤：

(1)分离单个核细胞；

(2)免疫去除CD3⁺T淋巴细胞，去除CD3⁺T淋巴细胞后的单个核细胞的接种浓度为0.1-2×10⁶cells/ml；

(3)加入无血清培养基和扩增组合物；

(4)培养第2-5天全换液；

(5)NK细胞收获；

其特征在于：步骤3中加入的扩增组合物为：咖啡碱、茶多酚、和IL-2。

2.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于：步骤3中加入的扩增组合物终浓度为10-500ng/ml咖啡碱、10-500ng/ml茶多酚、和500-2000U/ml IL-2。

3.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于：免疫去除CD3⁺T淋巴细胞的方法为免疫磁珠分选、膜泡分选和流式细胞仪分选等；去除CD3⁺T淋巴细胞后的单个核细胞的接种浓度为0.1-2×10⁶cells/ml。

4.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于所述咖啡碱浓度为120-350ng/ml，茶多酚浓度为100-300ng/ml。

5.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于所述IL-21浓度为1000-1600ng/ml。

6.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于所述单个核细胞来源于外周血、脐带血、骨髓或诱导性多能干细胞。

7.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于：所述茶多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG、表没食子儿茶精EGC、表儿茶素EC。其中更优选为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG其中一种或多种。

8.根据权利要求1所述体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，其特征在于：采用权利要求1-9任一所述制备的NK细胞用于肿瘤细胞免疫治疗。