[发明专利]一种用于软骨，肌腱，半月板保存的无冰晶冷冻保存液和冷冻方法

权利要求书

1.一种软骨，肌腱，半月板无冰晶冷冻保存液，其特征在于，包括乙烯乙二醇1.0-6.0mol/L、丙二醇1.0-7.0mol/L、羟乙基哌嗪乙硫磺酸0.1-2.5mol/L、Caspase抑制剂Z-VAD-FMK 10-50μmol/L、2-10mg/L的基质金属蛋白酶抑制剂GM6001和成分X；成分X选自0.05-1%（w/v）的聚乙烯醇；所述冷冻保存液导入冻存体系后，使用2-甲基丁烷覆盖冻存体系表层及周边。

2.根据权利要求1所述的软骨，肌腱，半月板无冰晶冷冻保存液，其特征在于，包括乙烯乙二醇2.0-5.0mol/L、丙二醇2.5-5.5mol/L、羟乙基哌嗪乙硫磺酸0.1-1.0mol/L、Caspase抑制剂Z-VAD-FMK 10-50μmol/L、2-10mg/L的基质金属蛋白酶抑制剂GM6001和成分X。

3.根据权利要求1所述的软骨，肌腱，半月板无冰晶冷冻保存液，其特征在于，乙烯乙二醇含量为2.5mol/L；丙二醇含量为2.5mol/L；羟乙基哌嗪乙硫磺酸含量为0.5mol/L。

4.根据权利要求1所述的软骨，肌腱，半月板无冰晶冷冻保存液，其特征在于，所述无冰晶冷冻保存液的其他成分为溶剂。

5.根据权利要求4所述的软骨，肌腱，半月板无冰晶冷冻保存液，其特征在于，所述的溶剂为Euro-Collin溶液。

6.权利要求1～5任一项所述的无冰晶冷冻保存液在软骨，肌腱或半月板冷冻保存中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，保存软骨，肌腱，半月板组织时，利用步进式方式向软骨，肌腱，半月板组织中导入权利要求1～4任一项所述的无冰晶冷冻保存液；所述步进式方式具体为在-5～+22℃条件下以10～25min步进逐量，按4～15步向软骨，肌腱，半月板组织中增量加入权利要求1～4任一项所述的无冰晶冷冻保存液，然后首先以-20℃～-70℃/分钟的速率第一次降温至-80℃～-120℃，再以-2℃～-40℃/分钟速率第二次降温至-120℃～-180℃，并在此温度下保存。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，导入权利要求1～4任一项所述的无冰晶冷冻保存液后，使用2-甲基丁烷覆盖冻存体系表层及周边。

9.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述的步进式方式具体为在2-4℃条件下以15min步进逐量，按6步向软骨，肌腱，半月板组织中增量加入无冰晶冷冻保存液，每次15min，向软骨，肌腱，半月板组织中导入无冰晶冷冻保存液。

10.根据权利要求7所述应用，其特征在于，第一次降温为-38℃～-50℃/分钟的速率降温至-90℃-110℃。

11.权利要求10所述应用，其特征在于，第一次降温为-43±2℃/分钟的速率降温至-100℃。

12.根据权利要求7所述应用，其特征在于，第二次降温速率为-2℃～-10℃/分钟速率第二次降温至-120℃～-150℃。

13.根据权利要求12所述应用，其特征在于，第二次降温速率为-3±0.2℃/分钟的速率降温至-135℃。