[发明专利]可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒

权利要求书

1.可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，它包括：免疫磁珠、溶液显色剂；所述的免疫磁珠为羧基化Fe₃O₄纳米粒子与抗金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体IgY偶联；所述的溶液显色剂包括：TMB溶液、HRP溶液和H₂O₂溶液。

2. 根据权利要求1所述的可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，其特征在于：所述的免疫磁珠浓度为0.5~0.8mg·mL^-1， TMB溶液浓度为1.0~2.5mg·mL^-1，HRP溶液浓度为1.0~10μg·mL^-1。

3. 根据权利要求2所述的可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，其特征在于：所述的免疫磁珠浓度为0.6mg·ml^-1，TMB溶液浓度为2.0 mg·mL^-1，HRP溶液浓度为2.5μg·mL^-1。

4.根据权利要求1、2或3所述的可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，其特征在于：所述的H₂O₂溶液用量为50μL，TMB溶液用量为50μL，HRP溶液用量为50μL。

5.根据权利要求4所述的可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，其特征在于：所述的羧基化Fe₃O₄纳米粒子是用以下方法制备的：

1）将1.08 g FeCl₃∙6H₂O 和 20 mL 乙二醇加入烧杯，超声溶解 10 min；

2） 向1）加入1.2 g 醋酸钠和0.2 g 柠檬酸三钠，超声溶解 10 min；

3） 向2）加入0.2 g PEG-6000，超声至完全溶解；

4） 将上述溶液3）转移反应釜中198℃反应 18 h ，反应釜冷却至室温后转移其中磁珠溶液至小烧杯中，用水和无水乙醇交替清洗磁珠三遍，得到羧基化Fe₃O₄纳米粒子。

6.根据权利要求5所述的可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒，其特征在于：所述的免疫磁珠是用以下方法制备的：

1） 取5mg羧基化Fe₃O₄纳米粒子，加入1mLPBS，超声重悬1~2min，磁性分离，所得磁珠用PBS洗涤2遍后，加入1mL PBS重悬；

2） 向1）中加入10mg EDC·HCl和5mg NHS，混悬30min后磁性分离，PBS洗3遍，加入1mLPBS重悬；

3） 向2）加入500μg抗金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体IgY，室温混悬2h后磁性分离，所得磁珠用PBS洗3次；

4） 加入1mL封闭液封闭1h，得到功能化免疫磁珠。

7.可视化检测食品中金黄色葡萄球菌的方法，它包括：

1） 取待测样品液100μL 加入上述免疫磁珠，反应体系1mL，室温混悬富集30~75min，磁分离，去上清，用PBS清洗；

2）加入H₂O₂溶液，分解反应1~4min，磁分离，取上清液；

3） 向2）中的上清液加入pH为4.0~6.0的显色液，所述的显色液包括：上述HRP溶液和TMB溶液，避光反应5min，肉眼观察颜色或采用紫外分光光度计测吸收光。

8.根据权利要求7所述的可视化检测食品中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：所述的富集时间为60min，H₂O₂分解反应时间为2min，显色液pH为4.5。