[发明专利]禽流感HA-Fd融合蛋白及其制备方法和疫苗在审
| 申请号： | 202010551928.4 | 申请日： | 2020-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN111662390A | 公开（公告）日： | 2020-09-15 |
| 发明（设计）人： | 贺笋;张国庆;于新茂;聂祥祥;孔楚心;张莹;周冰心;李健友;李延涛;潘毅平 | 申请（专利权）人： | 天康生物(上海)有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/145;A61P31/16 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 李双艳 |
| 地址： | 201210 上海市自由*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 禽流感 ha fd 融合 蛋白 及其 制备 方法 疫苗 | ||
1.一种禽流感HA-Fd融合蛋白，其特征在于，所述禽流感HA-Fd融合蛋白由N端至C端依次含有禽流感HA片段和噬菌体Fibritin foldon片段；所述禽流感HA片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述噬菌体Fibritin foldon片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的禽流感HA-Fd融合蛋白，其特征在于，所述禽流感HA片段和所述噬菌体Fibritin foldon片段通过连接肽连接。
3.根据权利要求2所述的禽流感HA-Fd融合蛋白，其特征在于，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求1-3任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白，其特征在于，所述禽流感HA-Fd融合蛋白由CHO细胞表达。
5.编码权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白的核酸。
6.根据权利要求5所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
7.生物材料，所述生物材料表达权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白和/或含有编码权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白的基因；所述生物材料包括表达盒、载体、重组微生物或细胞系中的至少一种。
8.权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括在宿主中表达编码所述的禽流感HA-Fd融合蛋白的基因；
优选地，所述宿主包括CHO细胞；
优选地，筛选稳定转染了编码所述禽流感HA-Fd融合蛋白的基因的宿主，然后单克隆高表达所述禽流感HA-Fd融合蛋白的宿主。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将编码所述禽流感HA-Fd融合蛋白的基因经密码子优化并合成优化后的基因；
(b)将步骤(a)得到的基因插入真核表达载体pcDNATM3.3-TOPO中，经酶切鉴定及测序，筛选出阳性重组载体，获得pcDNA3.3-HA-Fd质粒；
(c)将pcDNA3.1-HA-Fd质粒，使用FreeStyleTMMAX Reagent转染至CHO-S细胞，得到重组细胞CHO-HA-Fd；
(d)筛选稳定转染pcDNA3.1-HA-Fd质粒的CHO-HA-Fd细胞株，然后经单细胞克隆，获得高表达禽流感HA-Fd融合蛋白的细胞株。
10.疫苗，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白，权利要求5或6所述的编码所述禽流感HA-Fd融合蛋白的核酸，或权利要求7所述的生物材料；
优选地，所述疫苗包括权利要求1-4任一项所述的禽流感HA-Fd融合蛋白和佐剂，佐剂优选采用Montanide ISA 50V2。
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