[发明专利]一种靶向线粒体的纳米三苯基膦MoS2

权利要求书

1.一种靶向线粒体的纳米三苯基膦MoS₂量子点的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

首先，利用长度为零的交联剂N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基二亚胺盐酸盐将胺修饰的1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[氨基(聚乙二醇)-2000]和(3-羧基丙基)三苯基溴化膦通过氨基耦合反应结合在一起，形成DSPE-PEG-TPP；

然后，DSPE-PEG-TPP和二硫化钼量子点在三氯甲烷中混合，DSPE-PEG-TPP的疏水端二硬脂酰磷脂酰乙醇胺连接到二硫化钼量子点表面，而(3-羧基丙基)三苯基溴化膦端向外伸展，从而得到三苯基膦二硫化钼。

2.根据权利要求1所述的一种靶向线粒体的纳米三苯基膦MoS₂量子点的合成方法，其特征在于，三苯基膦修饰的纳米材料靶向线粒体实验方法如下：

利用荧光探针异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的三苯基膦二硫化钼量子点，形成发出绿色荧光的纳米材料，将该纳米材料分散到细胞培养基中孵育细胞；

然后将FITC标记的三苯基膦二硫化钼量子点分散液置换成线粒体荧光探针；孵育完成后，在激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照，FITC标记的三苯基膦二硫化钼量子点与线粒体共聚焦共定位的相关系数定量。

3.根据权利要求1所述的一种靶向线粒体的纳米三苯基膦MoS₂量子点的合成方法，其特征在于，具体如下：

1)DSPE-PEG-TPP的合成:

(1)搅拌混合：将20μmol(3-羧基丙基)三苯基溴化膦、60μmolN-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基二亚胺盐酸盐、60μmol N-羟基丁二酰亚胺和20μl三乙胺混合溶解到1ml三氯甲烷中；

将该混合液放在磁力搅拌器上常温搅拌2h，搅拌转速为1000rpm；

然后将50mg DSPE-PEG-NH₂溶解到2ml三氯甲烷中，将两者得混合液在室温下搅拌24h，搅拌转速为1000rpm；

(2)真空干燥：将以上混合液在真空干燥箱中37℃真空干燥4h，待三氯甲烷全部挥发干净后取出；

(3)透析：向干燥后的样品中加入高纯水，短暂涡旋后，将混合液转移到2KDa MWCO的透析袋中，放置到盛有2000ml高纯水的烧杯中室温旋转透析24h；

(4)膜过滤：将混合液从透析袋取出后，通过0.45μm的滤膜进行过滤并用高纯水清洗，除去这一过程中产生的副产品二环己脲；

DSPE-PEG-TP会被截留在滤膜表面上，经冷冻干燥后得到纯净的聚合物DSPE-PEG-TPP；

(5)保存：将该聚合物以浓度10mg/ml溶解到三氯甲烷中并在-80℃保存；2)三苯基膦二硫化钼量子点的合成:

(1)混合：将8mg二硫化钼量子点和25mg DSPE-PEG-TPP在25ml三氯甲烷中混合，搅拌均匀；

(2)干燥：利用旋蒸仪将大部分三氯甲烷挥发掉后，放置在真空干燥箱中80℃真空干燥1h；

(3)超声：向样品中加入8ml去离子水，在250W、53kH下超声1h；

(4)透析：游离的DSPE-PEG-TPP通过透析法除去，透析袋孔径为10kDaMWCO，室温旋转透析24h；

(5)保存：最终得到浓度1mg/ml的三苯基膦二硫化钼量子点，4℃保存；3)异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的三苯基膦二硫化钼量子点的合成:

(1)搅拌混合：将20μmol的FITC，20μl的三乙胺和50mg DSPE-PEG-NH2在10ml三氯甲烷均匀混合，放在磁力搅拌器上室温搅拌24h，搅拌转速为500rpm；

(2)干燥：取200μl上述混合液，加入1.5ml DSPE-PEG-TPP和10mg二硫化钼量子点，在25ml三氯甲烷中均匀混合；利用旋蒸仪将大部分三氯甲烷挥发掉后，放置在真空干燥箱中80℃真空干燥1h；

(3)超声：加入8ml去离子水，在250W，53kHz下超声1h；

(4)透析：游离的DSPE-PEG-TPP通过透析法除去，透析袋孔径为10kDaMWCO，透析时间为24h；

(5)保存：最终得到浓度1mg/ml的FITC标记的三苯基膦二硫化钼量子点，4℃避光保存；

4)三苯基膦二硫化钼量子点的靶向线粒体功能测定:

共聚焦共定位：将细胞置于激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照；

FITC标记的三苯基膦二硫化钼量子点与线粒体共聚焦共定位的相关系数通过软件ZEN2012定量。