[发明专利]一种基于钒酸银/钒酸铟的电化学发光传感器制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种基于钒酸银/钒酸铟纳米复合材料的电化学发光传感器制备方法及应用，属于电化学发光检测技术领域。开发并首次验证了四苯乙烯纳米簇与氧化铜纳米球能量转移对在低电位下可达到的高效电化学发光猝灭的行为。这一发现，一方面解决了发光材料在电极上的固定问题，另一方面解决了有效调节发光强度的问题。根据对不同浓度的原降钙素响应的电化学发光信号强度不同，实现对原降钙素的检测。通过采用F检验、T检验展示本方法的准确度和精密度，测试结果均小于理论值，说明该方法准确可靠。

技术领域

本发明涉及一种基于四苯乙烯纳米簇作为低电位电化学发光发射器并固载在钒酸银/钒酸铟纳米棒上，棒状结构加速了电子的传递，棒上分布的颗粒也增加了发光材料固定的位点，以氧化铜纳米球作为猝灭探针，两者发生能量转移的传感器制备及应用。具体是采用四苯乙烯纳米簇作为发光材料，氧化铜纳米球作为猝灭探针，并且采用多肽链实现对抗体的定向固定，实现了在-1.15 V的低电位激发，有效保护了蛋白质的活性，也提高对免疫物质检测的可行性。综上制备的一种检测原降钙素的猝灭型电化学发光传感器，属于电化学发光检测技术领域。

背景技术

SIRS指全身炎症反应即机体对多种细胞因子/炎症介质的反应，目前尚无明显的治疗方法。因此，原降钙素作为血清中SIRS的典型生物标志物，对SIRS的早期准确可靠诊断起着至关重要的作用。

目前对原降钙素的分析检测方法有很多。比如：放射免疫分析法、酶联免疫分析法等。但是存在所用的试剂有效期短，具有放射性污染，检测周期长，灵敏度低，步骤繁琐等诸多缺点。为了克服这些缺点，本发明设计了一种特异性强、灵敏度高、无放射性污染、操作快速简便的电致化学发光免疫分析方法。

电化学发光兼有电化学和化学发光两者的交叉渗透，因此同时具备发光分析的超高灵敏度与电化学电位可控的优点，所以引起了分析化学等诸多领域的高度重视。传统的发光材料虽然具有优秀的发光效果但难以稳定固载于电极表面，然而许多新型的发光体，例如硫化镉等镉基材料却有很高生物毒性或者必须施加高电位激发。因此，无毒、低电位激发且电极固载性好的发光材料成为了研究的重点。本发明以钒酸银/钒酸铟纳米棒作为基底固载四苯乙烯纳米簇，以氧化铜纳米球作为猝灭探针，构建了一种猝灭型的电致化学发光传感器用于原降钙素的检测。

发明内容

本发明的目的是针对现有传感器的发光材料发光效率优秀但毒性大或难于固载于电极表面等缺点提供一种适合的新型发光材料，并且针对现有的全身炎症反应综合症的检测方法存在的问题，提供一种新颖的基于氧化铜猝灭四苯乙烯纳米簇的电致化学发光免疫传感器的制备并实行对实际样品的检测应用，实现对全身炎症反应综合症的疾病标志物的快速、灵敏、特异、高效检。整个方法的投入能耗低，获得的效果理想，具有良好的应用前景。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1. 一种基于钒酸银/钒酸铟纳米复合材料的电化学发光传感器制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在处理好的电极表面滴加6 μL、浓度为0.5~5 mg/mL的四苯乙烯纳米簇分散液作为传感基底材料，4 °C下晾干成膜；

（3）加入3~8 mM巯基乙酸在4 °C下浸泡5 h后转入EDC/NHS混合体系中浸泡30 min来活化羧基；

（4）继续在4 °C条件下浸泡浓度为5~15 μg/mL的原降钙素抗体1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗净电极表面，4°C下晾干；

（5）在质量浓度为1~3%的牛血清白蛋白中浸泡来封闭非特异性活性位点，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，常温下晾干；