[发明专利]一种纳米-细菌的杂合体系的制备方法

权利要求书

1.一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)将浓度为25mg/mL的带有氨基基团的荧光纳米材料溶液和浓度为10mg/mL的多糖配体溶液按体积比3:2混合，并于70℃振荡反应4～6小时后，加入2倍混合液体积的浓度为10μg/mL的硼氢化钠溶液，于室温下振荡反应过夜，超滤离心除去多余的未反应上的多糖配体分子，制备得到多糖配体偶联荧光纳米材料复合物溶液；

(2)将步骤(1)制备得到的多糖配体偶联荧光纳米材料复合物溶液和浓度为200μg/mL的光热剂溶液按体积比2：1混合后，于室温下振荡反应12～24小时，通过超滤离心除去未反应上的光热剂分子，得到荧光纳米探针溶液；

(3)将可在特定温度下表达肿瘤坏死因子TNFα的质粒pBV220-TNFα按质粒转化方法转化入细菌中，得到可表达抗肿瘤分子的工程菌，将工程菌活化清洗后溶于生理盐水中制成浓度为1.0×10⁷-1.0×10⁸CFU/mL的工程菌悬液；

(4)将步骤(2)制备得到的荧光纳米探针溶液和步骤(3)得到的工程菌悬液按体积比1:5混合后，置于摇床中培养一段时间后，超滤离心去除未结合的荧光纳米探针后，采用0.9wt％的NaCl溶液对细菌离心清洗，得到纯化的纳米-细菌杂合体系。

2.根据权利要求1所述的一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的荧光纳米材料包括荧光硅纳米颗粒、复合荧光二氧化硅纳米颗粒、II-IV族量子点、荧光纳米微球和荧光纳米碳点中的任一种，所述的多糖配体包括麦芽糖糊精、直链淀粉和葡萄糖聚合物中的任一种。

3.根据权利要求1所述的一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的光热剂包括吲哚菁绿(indocyanine green，ICG)、IR780和花菁类染料中的任一种。

4.根据权利要求1所述的一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的超滤离心条件为采用3K的超滤管，于7500rpm下离心处理15min。

5.根据权利要求1所述的一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的抗肿瘤分子包括细胞毒性分子、细胞因子和肿瘤抗原中的任一种；所述的细菌包括大肠杆菌、沙门氏菌和芽孢杆菌中的任一种。

6.根据权利要求1所述的一种纳米-细菌杂合体系的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述的培养时间为1.5-2.5小时，温度为37℃，摇床转速为200rpm；所述的超滤离心条件为8000rpm下离心处理10min。