[发明专利]一种表达酸性β-甘露聚糖酶的基因及其载体和应用

权利要求书

1.一种用于表达酸性β-甘露聚糖酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQID NO:3。

2.一种含有如权利要求1所述基因的表达盒、重组载体或重组微生物。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含如权利要求1所述的基因。

4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为包含如权利要求1所述的基因的pPICZαA质粒。

5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，如权利要求1所述的基因经EcoRI和NotI限制性内切酶酶切后连接到pPICZαA质粒中。

6.一种用于表达β-甘露聚糖酶基因的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株包含如权利要求3-5中任一项所述的表达载体。

7.如权利要求6所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的宿主菌为毕赤酵母菌。

8.如权利要求3-5中任一项所述的表达载体或如权利要求6-7中任一项所述的重组菌株在发酵制备β-甘露聚糖酶中的应用。

9.一种酸性β-甘露聚糖酶的发酵方法，其特征在于，包括：

将如权利要求6或7所述的重组菌株接种于发酵培养基中，发酵过程中用氨水将pH值维持在4.5-5.0，培养温度28-30℃；当甘油耗尽后，流加质量分数为50％的甘油，流加速率为10-20 mL/L/h；将菌体湿重维持在200-250 g/L；然后开始甲醇诱导，甲醇流速控制在3-7mL/L/h；整个发酵过程中通气比维持在1:1.5，搅拌转速为 140rpm；

其中，所述发酵培养基含有甘油20-50 g/L，磷酸二氢铵30-60 g/L，磷酸二氢钾5-15g/L，硫酸钾5-15 g/L，硫酸镁10-20 g/L，硫酸钙0.5-2g/L，氢氧化钾1-2g/L，PTM1 4-7g/L。