[发明专利]自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法及其应用

说明书

本发明提供了自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法及其应用。具体地，本发明提供了一种表达突变型NMDAR的重组细胞，所述重组细胞表达外源的突变型NMDAR和荧光蛋白的融合蛋白，且转染成活率高。本发明的重组细胞可用于检测自身免疫性脑炎相关的抗体，包括NMDAR、AMPAR1、AMPAR2、LGI1、Caspr2、GABA_BR。本发明还提供了基于本发明的重组的转染细胞系，利用转染细胞系通过间接免疫荧光法来检测抗自身免疫性脑炎方法。本发明的方法具有高敏感性和特异性，可以精确检测致病抗体种类，以便帮助患者实施针对性免疫治疗，恢复健康。

技术领域

本发明涉及医学领域，具体地涉及自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法及其应用。

背景技术

自身免疫性脑炎(Autoimmune encephalitis,AE)是近10余年来新进被认识的一类中枢神经系统自身免疫性疾病，其特点是患者体内存在抗神经元表面蛋白、离子通道和受体的自身抗体，这些自身抗体被认为具有致病性，可以成为疾病诊断的标志物。AE患者常表现出精神行为异常、癫痫发作、记忆障碍、认知异常、运动异常、自主神经功能紊乱、意识下降等严重的临床症状，但早期的免疫治疗可取得很好的疗效与疾病转归。一般而言，常见的介导AE的特异性自身抗体有NMDAR、AMPAR1、AMPAR2、LGI1、Caspr2、GABA_BR六种，并且不同抗体介导的AE患者与伴发肿瘤及预后均有较大差异。因此，及时准确检测相关自身抗体对AE早期诊治具有极其重要的意义。

2005年，在4例年轻女性卵巢畸胎瘤患者中首次发现了记忆缺失、精神症状、意识水平下降及通气不足的一组症状^[1]。很快在这些患者以及其他几例类似神经系统症状的患者中检测出一种N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR)的特异性抗体。此后，陆续报道的病例中有很多是儿童或青年男性患者，可伴或不伴肿瘤。此病被命名为抗NMDAR脑炎(Anti-NMDAR encephalitis)。

研究表明，自身免疫性脑炎抗体是造成自身免疫性脑炎的病因之一，然而，本领域尚缺乏敏感性和特异性均高的AE自身抗体的检测方法。

虽然尝试开发基于AE自身抗体-NMDAR之间的相互作用来进行检测的方法，但是重组表达和纯化的NMDAR构象与天然状态下的NMDAR构象存在差异，导致灵敏度和特异性较差。

另一种检测方法是基于活细胞分析(Cell-based Assay,CBA)，一种代表性的方法是间接免疫荧光法。在该方法中，一般通过重组转染细胞系表达NMDAR亚基(NR1和NR2A)，然后通过间接免疫荧光法来检测抗NMDAR抗体，具有一定的敏感性。然而，该方法还存在缺点，例如NMDAR亚基(NR1和NR2A)会导致细胞大量死亡，导致测量不够准确，且重复性差。

因此，本领域迫切需要开发新的高敏感性和高特异性AE自身抗体的检测方法。

发明内容

本发明的目的就是提供一种高敏感性和高特异性的AE自身抗体的检测方法。

本发明的另一目的是提供了一种基于本发明的重组的转染细胞系，利用转染细胞系通过间接免疫荧光法来检测抗自身免疫性脑炎方法。

在本发明的第一方面，提供了一种制备重组细胞的方法，所述方法包括步骤：

(a)提供待转染的细胞以及用于转染的第一质粒和第二质粒；其中，所述的细胞为待转染的细胞为肾细胞，

所述的第一质粒含有第一表达盒，所述第一表达盒用于表达式I所示的融合蛋白P0，

Z1-Z2 (I)

式中，