[发明专利]一种锰-真黑素纳米粒子猝灭鲁米诺检测降钙素原的电化学发光传感器

权利要求书

1.一种锰-真黑素纳米粒子猝灭PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯固载的鲁米诺检测降钙素原的电化学发光传感器的制备方法，制备步骤如下：

（1）将氧化铟锡（ITO）切割成1×1.5 cm²的玻璃片，分别用无水乙醇、丙酮和超纯水清洗切割好的玻璃片，烘箱70 ℃干燥；

（2）将6 µL 5～10 mg/mL鲁米诺-PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯的壳聚糖溶液滴涂到ITO电极表面，室温保存至干燥；

（3）滴涂6 μL 500 μg/mL一抗溶液于ITO电极表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（4）滴涂3 μL质量分数为1%的牛血清白蛋白，封闭非特异性活性位点，4 ℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（5）将6 μL不同浓度的降钙素原滴涂在电极表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（6）将6 µL 1～5 mg/mL二抗/Mn-真黑素溶液滴涂在电极表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测降钙素原的电化学发光免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种锰-真黑素纳米粒子猝灭PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯固载的鲁米诺检测降钙素原的电化学发光传感器的制备方法，所述鲁米诺-PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯的壳聚糖溶液，制备步骤如下：

（1）PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯的制备

将20～40 mg CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯分散在15 mL乙二醇中，加入45 mg L-脯氨酸，超声1 h；

然后，在上述溶液中加入100 μL H₂PtCl₆·6H₂O和7 mg CoCl₂·6H₂O，搅拌混匀；

将其转移至100 mL反应釜中，180 ℃反应12 h，离心、洗涤、干燥得到PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯；

（2）鲁米诺-PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯的壳聚糖溶液的制备

将制备的1 mL 1 mg/mL PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯加入到1 mL含有1～5 mmol/L鲁米诺过夜搅拌，通过静电吸引将鲁米诺结合在复合材料表面，离心分离去除未结合的鲁米诺，得到鲁米诺-PtCo-CuFe₂O₄杂化氧化石墨烯，并将其分散在质量分数为0.5%的壳聚糖溶液中；

所述质量分数为0.5%的壳聚糖溶液，是将0.5 g壳聚糖加入到100 mL体积分数为1%的乙酸中，搅拌2 h制得。